芦荟提取物芦荟大黄素aloe—emodin含量测定方法概况 |
发布时间:2015-05-20 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2480 |
芦荟大黄素又称芦荟泻素。橙色针状结晶 (由甲苯中)。熔点223℃~224 。易溶于热乙醇,在苯及乙醚 中呈黄色。在氨水和硫酸【f|呈绯红色,属蒽醌类化合物,在酸 性溶液f}1被还原则生成蒽酚及其互变异构体的蒽酮llI。它广 泛存在于百合科芦荟,豆科决明子,蓼科植物大黄中,具有抗 菌、消炎、杀虫、抗癌、抗衰老等功效 。而芦荟、大黄、决明子 等都具药用价值,所以,本文参考曾云瑾 的文献对各种芦荟 大黄素检测方法进行了综述比较,为快速、灵敏检测芦荟大黄素(aloe—emodin)提供参考。 关键词:芦荟大黄素(aloe—emodin) 芦荟提取物 长沙上禾生物 1,1 高效液相色谱法 曾晓英l 4_分别取各芦荟制品1g,置25mL量瓶中,加甲 醇稀释至刻度,摇匀,超声处理15min,取上清液5mI 嚣 lOmL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成样品溶液。流动 相:甲醇一0.1%高氯酸(6:4);流速:lmI /rain测定波长 254nm。样品含量测定结果:l0倍芦荟全叶粉含芦荟大黄 索为0.004%;1000倍芦荟汁粉含芦荟大黄素(aloe—emodin)为0.03%;芦 荟提取物含芦荟大黄素(aloe—emodin)为O.32%。不同用途芦荟制品应根 据实际应用制定芦荟大黄素(aloe—emodin)含量指标。采用此方法测定 芦荟制品中芦荟大黄素(aloe—emodin)含量,简便快速,灵敏度高,重现 性好,可作为控制芦荟制品质量测定方法。方子季等 先 取复方芦荟胶囊内容物约50mg,精密称定,加甲醇20mL, 超声提取30min,定容25mL,过滤,精密吸取续滤液10mL 加60%三氯化铁lmL,盐酸6mI ,水浴回流4h放冷,加酚 酞指示液l滴,滴加浓氨溶液至溶液变浅红色。此时产生红色氢氧化铁沉淀,以甲醇定容50mL,摇匀。量取约 lOmL,离心沉淀3rain。精密量取上清液5mL水浴蒸干,放 冷,以甲醇溶解并定容5mL,过滤得胶囊水解液。另精密 吸取芦荟鲜汁20mI ,按上述方法加试剂回流并定容5mL, 过滤得鲜汁水解液。取水解液在287nm波长处,以甲醇: 水(70:30)为流动相,以外标法测定。芦荟大黄素(aloe—emodin)线性范 围为O.04—0.4 g,在此范围内浓度与峰面积线性关系良 好(r=0.9999)。芦荟大黄素(aloe—emodin)平均回收率为102.5%,RSD为 3.6%。郭华等【6J用反相高效液相色谱法测定芦荟汁中芦荟大黄素(aloe—emodin)的含量,选用YwG—c, 色谱柱(200minx4.5ram, 51xm),以甲醇一水(55:45)为流动相,流速hnL/rain,检 测波长为225nm,柱温为3O℃ 。线性范围:0.0066tzg~ 0.066~g,r=0.9997;回收率为100.05%,RSD1.28%。马晶军 等[7]通过对比试验探讨了对芦荟中芦荟大黄素(aloe—emodin)的提取方 法,对HP[ C法同时测定芦荟体内芦荟大黄素(aloe—emodin)和芦荟苷含 量的方法进行了探讨,并最终确立了应用HPLC测定芦荟 体内芦荟大黄素(aloe—emodin)和芦荟苷含量的色谱条件。流动相:甲 醇一水(70:30);流速1.OmL/min;测定波长293nm。结果 表明,甲醇的提取效果比50%甲醇要好,超声波提取3O min 即可提取完全。 1.2 薄层扫描法 邓郁琼等嗍准确量取样品20mL,置于分液漏斗中,用四 氯化碳分3次提取,每次2OraL,合并四氯化碳液,于旋转蒸 发器中蒸干,用甲醇溶液并定容至lmL,供点样用。将样品溶 液点于硅胶层析板上,以乙酸乙酯一甲醇一水(100:5:1)作为展开剂,展开,取出,晾干,用10%氢氧化钾甲醇溶液显色。 扫描条件:测定波长为490nm,参照波长为690nm,线性化器 为SX=3,狭缝为0.4mmx5.0mm,用反射扫描。结果测得芦荟大黄素(aloe—emodin)为1.70Ixg/mL,RSD值为1.34%,回收率为98.44%, RSD0.64%。上述试验表明,薄层扫描法是一种灵敏度较高, 操作简便快速的方法。 1.3 分光光度法 1.3.1 荧光光度法齐叠福 利用荧光光度法研究确定了测 定芦荟大黄素(aloe—emodin)的适用条件。在10mL比色管中依次人 2mL0.5too1.L 的NaC1溶液,2mLTris—HCI缓冲溶液,ImL乙 醇,一定体积的O.Img/mL的芦荟大黄素(aloe—emodin)乙醇溶液,在kex/ em=470/540nm,pH=7.0的实验条件下扫描芦荟大黄素(aloe—emodin)的荧 光光谱,测定的线性范围为1.0~8.1p.g/mL,检测限为0.0311~g/ mL,方法精密度为2.18%,并成功地测定了样品决明子,血清 和尿样中芦荟大黄素(aloe—emodin)的含量。 黄丽英等㈣用荧光光度法测定芦荟康胶囊中的芦荟大黄 素的含量。在pH为5.76的HAc—NaAc缓冲液中和十二 烷基磺酸钠(SDS)表面活性剂存在下测定芦荟大黄素(aloe—emodin)的 hex和hem。结果表明,芦荟大黄索浓度在1.0x10-6_2.5x 10~mol/L,与其荧光强度呈线性关系,检测限为2×10 mol/ L。芦荟大黄素(aloe—emodin)的kex和hem分别为460nm和550nm,有 较强荧光;而在hex和hem分别为387nm和533nm的体系 时无荧光。荧光法用于物质的定量分析,其优点是灵敏度 比紫外可见分光光度法高,与文献1“】分光光度法比,检出 下限低二个数量级;同时其选择性好,干扰少,但荧光法 的应用不如紫外可见分光光度法广泛,因许多物质本身不 会发荧光。 1.3.2 紫外可见分光光度法黄丽英等【l1J根据双波长原理, 分别在测定波长255nm和376nm,参比波长355nm 和 475nm处测定芦荟大黄素(aloe—emodin)和芦荟甙含量。芦荟大黄素(aloe—emodin)在 2.OOxlO~-5.OOxlO mol/L浓度范围内与光密度(D)呈线性关 系,r=O.9995;芦荟甙在2.OOxlO~~6.OOxlO mol/L浓度范围内 与D呈线性关系,r=-0.9998。应用单波长Uv法不能直接分别 测定芦荟大黄素(aloe—emodin)和芦荟甙,测定时互相干扰,因为两组分的 吸收光谱互相重叠[121。应用等吸收双波长法,测定时可消除互 相干扰问题。测定芦荟大黄素(aloe—emodin),选用D 和D ,255nm是 芦荟大黄素(aloe—emodin)一特征吸收峰,而芦荟甙的D 与D, 相等, AD=D 一 =KC1,求两波长处D之差△D,消去了芦荟甙 吸收,因此△D=KC1与芦荟大黄素(aloe—emodin)浓度呈正比。同样测定芦 荟甙时,选择测定波长为355nm,参比波长为475nm,消除 芦荟大黄索的干扰。芦荟切割创面处汁液其芦荟大黄素(aloe—emodin)、 芦荟甙的含量>芦荟皮、芦荟全叶>芦荟胶。等吸收双波长 分光光度法操作快速、简便、准确,无需分离可同时测定 芦荟样品中两组分含量。林新华等fl3】根据两种物质的吸收 光谱,选择芦荟大黄素(aloe—emodin)甙为标准加入组分,在芦荟大黄素(aloe—emodin)的等 吸收波长361.4nm和480.9nm处进行标准加入测定。芦荟大 黄素甙和芦荟大黄素(aloe—emodin)浓度在0 1xlO mol/L范围内均符合比尔定律。对库拉索芦荟中芦荟大黄素(aloe—emodin)甙和芦荟大黄素(aloe—emodin)含 量测定的相对标准偏差(n=6)小于2%。此文根据标准加 入法特点和双波长等吸收法原理而提出的双波长标准加 入法将两者有机地结合起来,改善了选择性又不降低灵敏 度。 李光文等[1 依据芦荟苷与芦荟大黄素(aloe—emodin)的光谱特征,选择 350~450nm为测定波长范围,用多波长直线回归分光光度 法同时测定芦荟中芦荟苷和芦荟大黄素(aloe—emodin)含量。在测定波长 范围内间隔lnm测定样品溶液的吸光度值,建立回归方程 A/ 芦荟大黄索=C芦荟苷·芦荟苷, 芦荟大黄索+C芦荟大黄索,芦荟苷和芦荟大黄素(aloe—emodin)的测定回收率分别为97.4%~102.5%、97.5%一100.7%, RSD分别为0.22%~0.89%、0.35%~0.82%,测定时二者无相 互干扰。本方法简便可靠,重现性好,为芦荟资源的进一步 开发利用及质量控制等提供新的方法和重要依据。 庚梅等旧利用芦荟甙和芦荟大黄素(aloe—emodin)吸光度的良好加和 性,提出了一种同时测定芦荟甙和芦荟大黄素(aloe—emodin)的方法。在只 加入氨水的情况下,分别作芦荟甙和芦荟大黄素(aloe—emodin)的工作曲 线;在加入氨水和高碘酸钠溶液的情况下,作芦荟甙和芦荟 大黄素的另外两条工作曲线。样品在同样的两条件下,分 别测出吸光度,由四条工作曲线联立方程组求解,即可同 时求出芦荟甙和芦荟大黄素(aloe—emodin)的量。芦荟甙的测定下限为 0.0024mg/mL;芦荟大黄素(aloe—emodin)的测定下限为O.O006mg/mL。样 品分析结果相对标准偏差小于7% ,加样回收率99%一 101%。 1.4 电化学分析法 芦荟大黄素(aloe—emodin)分子中的蒽醌结构具有电化学活性 ,利用电 化学检测高灵敏度的检测特性可实现对微量芦荟大黄素(aloe—emodin)的测 定。伏安法和极谱分析法都是通过由电解过程中所得电流一 电位(电压)或电位一时间曲线进行分析的方法。它们的区别 在于伏安法使用的极化电极是固体电极或表面不能更新的液 体电极,而极谱分析法使用的是表面能够周期更新的滴汞电 极。 1.4.1 极谱法邹洪等口日用单扫示波极谱法研究了芦荟大黄素(aloe—emodin)的电化学行为。在5%Na CO +5%NaOH(9+1)底液中,芦 荟大黄素于一0.84V(P.)和一0.97V(P )处产生两个示波极谱 峰,利用P。可测定芦荟大黄素(aloe—emodin),线性范围为0.11~2.4mg/L和 3.0~28.6mg/L,检测限为0.06mg/L。本文研究了芦荟大黄素(aloe—emodin)在 水溶液中的电化学行为,提出了电极反应机理,建立了芦荟 大黄素的单扫示波极谱分析方法,测定了中药大黄中的芦荟大黄素(aloe—emodin)的含量,结果良好。还考察了芦荟大黄素(aloe—emodin)对超氧自由 基的清除作用。 1.4.2 差示脉冲安家法芦荟大黄素(aloe—emodin)在良好质子源体系中 存在一个准可逆的双质子双电子转移过程,利用该特性可建 立芦荟大黄素(aloe—emodin)含量测定的电化学分析方法。陈伟等【l研究了芦荟大黄素(aloe—emodin)在玻碳电极上的电化学性质,建立了其含量测 定的差示脉冲伏安法,并对测定条件进行了优化。在 pH4.0的磷酸盐缓冲溶液,开路搅拌富集2min,于0.4一0.8V电位范围用差示脉冲伏安法测定芦荟大黄素(aloe—emodin)的还原 峰电流。在5×10一一2x10。mol/L范围内,芦荟大黄素(aloe—emodin)的差 示脉冲伏安峰电流与其浓度有良好的线性关系,检测限 为3x10一Smol/L。差示脉冲伏安法利用加脉冲电压的方法, 消除电容电流及法拉第电流的畸变,并有效地消除了支 持电解质中杂质的影响,具有高灵敏度特征。该方法重现 性好,可直接测定芦荟中的芦荟大黄素(aloe—emodin)含量,并可实现对 微量芦荟大黄素(aloe—emodin)的测定。 1.4.3 碳糊电极上的吸附催化伏安法黎拒难等 提出了一 种以溶解氧为氧化剂,在碳糊电极(CPE)上吸附催化伏安法 测定含蒽醌基药物的新方法。用线性扫描伏安法、循环伏 安法和恒电位电解等手段研究了该催化伏安峰产生的 机理。实验表明,芦荟大黄素(aloe—emodin)能够有效地吸附富集在 CPE表面上。在阴极化电位扫描过程中,芦荟大黄素(aloe—emodin)被 还原成蒽氢醌化合物,然后又立刻被溶液中的溶解氧氧 化为芦荟大黄素(aloe—emodin),接着又在电极上被还原,从而形成一个 催化循环。而在汞电极上芦荟大黄素(aloe—emodin)产生一个可逆的氧 化还原反应,观察不到其催化反应。在0.56mol/L NH 一 NH C1(pH8.9)缓冲溶液中,芦荟大黄素(aloe—emodin)在CPE上于一0.60V (vs.SCE)产生一灵敏的催化伏安峰,所述方法应用于中药大 黄中的芦荟大黄素(aloe—emodin)的测定,与高效液相色谱法的测定结果基 本一致。有机化合物在CPE和其他固体电极上的吸附催化伏 安法灵敏度高,且电极无毒,显示出与汞电极不同的反应机 理。它对于药物药理、药效、药物毒性、临床医学和生物化学 有重要的意义。 1.4.4 1.5阶微分阳极溶出伏安法林新华[19研究了芦荟大黄素(aloe—emodin)在以0.1mol/L HAc(pH2.89)支持电解质,玻碳电 极为工作电极的吸附伏安行为。结果表明芦荟大黄素(aloe—emodin)存 在一个准可逆的双电子转移过程,其峰电流ID和峰电位 Ep与溶液pH值有关。同时还建立了用1.5阶微分阳极溶 出伏安法测定含量的新方法。在一0.80V(VS.SCE)电位下富 集,可得一灵敏的微分阳极溶出峰,峰电位Ep为一0.38V, 峰电流Ip与芦荟大黄素(aloe—emodin)的浓度在2.0×1O~ 8.0x10—6mol/L 范围内成线性关系,最低检出限为1.0x10~mol/L。该法操 作简便,灵敏度高,干扰少,可用于不同品种芦荟中芦荟 大黄素的直接测定。 2 小结 目前,芦荟大黄素(aloe—emodin)测定的方法虽多,但是结果却相差很 大,如曾晓英 采用高效液相测得l0倍芦荟全叶粉含芦荟大 黄素为0.004%;1000倍芦荟汁粉含芦荟大黄素(aloe—emodin)为O.03%;芦 荟提取物含芦荟大黄素(aloe—emodin)为O.32%。马晶军等171用高效液相测 得库拉索芦荟中芦荟大黄素(aloe—emodin)的含量为365.5mg/kg。郭华等嘲 用反相高效液相色谱法测定芦荟汁中芦荟大黄素(aloe—emodin)的含量,不 同批号测得的结果分别为0.1331 p,g/mL,0.1112 I~g/m[ , O.0865txg/mL,0.0717Ixg/mL,O.0614p,g/mL。荧光法比紫外分 光光度法的灵敏度高,选择性好,干扰少,但因许多物质本身 不会发荧光,所以,荧光法的应用不如紫外可见分光光度法广泛。邹洪等【 叼院电化学法来测定芦荟大黄素(aloe—emodin)的含量,此法具 有很高的灵敏度,可实现对微量芦荟大黄素(aloe—emodin)的测定,但因其专 业性强不易被接受,故用的较少。可见,对芦荟大黄素(aloe—emodin)含量测 定方法进行系统研究,找出消除系统误差的方法,正确评价不 同分析方法所得结果之问的可比性,确定各种分析方法的定 量分析适用性指标,对于指导分析人员对结果的精确度及准 确度的要求、所具备的仪器及试剂等选择适当的分析方法是 十分必要的。 芦荟大黄素(aloe—emodin)已广泛应用于医药、食品、保健品和化妆 品。因此,加大对芦荟大黄素(aloe—emodin)分析方法的研究,对含有芦荟 大黄素的芦荟、大黄、决明子等的开发利用有着重要的意 义。 芦荟大黄素(aloe—emodin)生产企业:长沙上禾生物科技有限公司 www.staherb.com www.staherb.cn |