和厚朴酚(honokio)注射剂制备工艺和含量测定的研究 |
发布时间:2015-04-15 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:1745 |
和厚朴酚(honokio1)是我国传统中药厚朴(Magnolia of— ficinalis Rehd.et Wils.)与凹叶厚朴(M.officinalis Rehd.et wils."/.Jar.biloba Rehd.et wils.)中提取分离得到的木脂素 类化合物,具有肌肉松弛[ 、抗焦虑[ 、中枢抑制[ 、抗氧 化[ ·5·6· 、抗心律失常[8· 、抗肿瘤[10,II]等多种药理活性。 关键词: 和厚朴酚(honokio) 中药厚朴 注射剂 上禾生物 1 仪器与试药 1.1 仪器 高效液相色谱系统:WatersSlO型泵;岛津SPD-10Avp 型UV—VIS检测器;81—2型恒温磁力搅拌器;DHP一781型电 热恒温培养箱;Denverl/10万分析天平。 1.2 试药 和厚朴酚(honokio1)对照品(中国药品生物制品检定所);和厚朴酚 (本室提供,含量≥99%);A1(SE,AR,天津天泰精细化学品 有限公司)A2(F68,AR,沈阳药科大学药厂);A3(EL,BASF 公司);BI(甘油)、B2(乙醇)、B3(二甲基乙酰胺)、甲醇均为分 析纯(北京化工厂);O。(亚硫酸氢钠,AR,浙江省永嘉县化工 试剂厂);02(亚硫酸钠,AR,北京化工厂);03(维生素C, AR,北京求贤化工试剂厂);重蒸水(自制)。 2 方法与结果 2.1 实验设计 分别选用3种增溶剂A。、A2、A3,3种助溶剂B。、B2、B3, 3种抗氧剂O1、02、03和3个pH值6、7、8,按照正交试验方 法共设计9组试验,以和厚朴酚的溶解程度、稀释后溶液的 澄明度以及稳定性试验结果为依据筛选处方。 2.2 配制工艺 精密称取和厚朴酚(honokio)适量置于三角瓶内,加入增溶剂A 和助溶剂B各适量,搅拌至和厚朴酚完全溶解,将抗氧剂O 溶解于适量水中,加入至上述溶液中,搅拌均匀,再加适量水至一定体积。调pH值到设定条件。所制得的注射液过0. 45 m的微孔滤膜,充氮气,灌封,100℃ 的水浴中常压煮沸 30min灭菌,即得。 2.3 和厚朴酚的溶解性考察 试验结果表明:在1,4,5号样品中,和厚朴酚不能完全 溶解,溶液浑浊。取2,3,6,7,8,9号样品分别稀释于适量生 理盐水中,6号样品出现浑浊。 2.4 和厚朴酚注射液稳定性考察 将2,3,7,8,9号样品分别置100℃ 下进行3周高温稳定 性试验。以溶液颜色与和厚朴酚的含量为依据进行筛选。 3、7号试验组在放置24h后,溶液颜色变为深棕色。2、8、9 号试验组在100℃加速条件下考察制剂稳定性,三周内制剂 溶液颜色无变化。其含量测定结果表明2号试验组的含量 保持稳定,8、9号试验组的含量逐渐降低。 2.5 处方筛选 根据以上实验结果,确定和厚朴酚注射剂的处方为:和 厚朴酚500mg,增溶剂A。(SE)、助溶剂B2(乙醇),抗氧剂02 (亚硫酸钠)适量,调节pH值到7,加入重蒸水到125mL。 3 含量测定方法的建立 3.1 对照品溶液的配制 精密称取和厚朴酚对照品适量, 加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。 3.2 色谱条件Diamonsil C18柱(5肿,4.6mm×250mm)色 谱柱;甲醇一0.05%磷酸二氢钾(77:23)的流动相。流速 1.0mL·min-。;室温;进样量10pL;检测波长294nm。在上 述条件下其它成分对和厚朴酚的测定无干扰。 3.3 线性关系的考察 将和厚朴酚对照品溶液经0.45 m微孔滤膜滤过,分别 精密吸取续滤液2,4,8,12,16,20pm注入高效液相色谱仪, 记录峰面积。以和厚朴酚进样量对峰面积进行线性回归。得 标准曲线方程为C=4.4675×10一 A+3.0369×10~ .r= 0.9998。线性范围为0.208~2.08pg。 3.4 精密度实验 精密移取和厚朴酚注射液0.50mL置10mL量瓶内。加 甲醇稀释至刻度。滤过,精密吸取6btL进样,连续测定5次。计算精密度,结果表明:样品精密度RSD=0.86%,说明精 密度良好。 3.5 稳定性实验 精密移取和厚朴酚注射液0.30mL置于10mL量瓶内, 加甲醇稀释至刻度。照上述方法于1日内每小时测定,计算 8h内的稳定性。结果表明:样品日内稳定性RSD:1.18%。 按照上述方法分别于5日内连续测定,记录峰面积,计 算样品日间稳定性。结果表明:样品日间稳定性RSD: 0.37%。和厚朴酚注射液样品在5d内稳定。 3.6 加样回收率实验 精密量取和厚朴酚注射液0.25mL置于10mL量瓶内, 共6份,其中5份加入适量和厚朴酚对照品溶液,1份作为 空白,分别用甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45t~m微孔滤膜过 滤,精密吸取续滤液10/~L进样。计算和厚朴酚的回收率,见 表1。和厚朴酚注射液的加样回收率在99.41%~100.79% 之间,平均加样回收率为(100.14±0.54)%,符合95%~ 105%的要求。 3.7 重现性实验 取和厚朴酚注射液,精密移取0.25mL置于10mL量瓶 内,共6份,分别加甲醇稀释至刻度,按照上述方法测定。和厚朴酚注射液重现性RSD=1.34%,(n=3),重现性良好。 3.8 含量测定 分别精密称取3批和厚朴酚注射液0.25mL 3份置于 10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45t~m微孔滤 膜过滤,即得供试品溶液。精密吸取供试品溶液10/~L进样, 计算和厚朴酚含量,见表2。 4 讨论 4.1 厚朴作为常用中药,具有燥湿消痰、下气除满等功效。 用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。 研究表明口服和厚朴酚的生物利用度低,只有少量原型药物 吸收,因此口服给药主要作用于消化道。药理研究表明和厚朴酚具有抗焦虑、中枢抑制、保护心肌、抗心律失常、保护大 脑、抗肿瘤等活性。所以我们认为给药途径是影响药效的一 个重要因素,为此设计制备了和厚朴酚注射剂。 和厚朴酚为木脂素类化合物,在有机溶剂中有良好的溶 解性,但在水中的溶解度很小;并且和厚朴酚长期放置于空气中容易氧化。以上特性均不利于注射剂的制备,因此我们 选用增溶剂、助溶剂以及抗氧剂制备和厚朴酚注射剂,使和 厚朴酚能够达到有效的治疗剂量,并能够保持药物稳定。 4.2 本文采用了100℃ 下进行处方稳定性筛选的试验条 件,在此苛刻的条件进行3周试验,处方8、9和厚朴酚含量 呈下降趋势,而处方2的和厚朴酚含量保持稳定,说明该处 方有良好的稳定性,适合用于制备和厚朴酚注射液。 4.3 本文建立了和厚朴酚注射剂中和厚朴酚含量测定的 RP—HPLC法。在该液相色谱条件下和厚朴酚的测定不受干 扰,峰形对称,该方法简便、准确、重现性好,可作为和厚朴酚注射剂质量的检测方法。 |