RP—HPLC法同时测定芦荟汁中芦荟苷和芦荟大黄素的含量

 摘　要:建立了应用RP—HPLC法同时测定芦荟汁中芦荟苷和芦荟大黄素含量的方法．流动相：甲醇-水（55：45）；检测波长：225nm；线性范围：芦荟苷为0．0162μg～0、162μg，r=-0.9998，芦荟大黄素为0．0066μg～0.066μg，r=0．9997；平均回收率：芦荟苷为101．13％，RSD1．39％，芦荟大黄素为100.05％，RSD1.28％。该方法灵敏，准确，简便快速.
 关键词:RP—HPLC 芦荟苷 芦荟大黄素 长沙上禾生物 芦荟提取物

 Simultaneous Determination for Aloin and Aloe-emodin in Aloe Juice by RP- HPLC

 Abstract:A new simultaneous determination for aloin and aloe-emodin in Aloe iuice by RP-- HPLC was established. The mobile phase consisted of methanol-water（55：45） and detection was at 225nm;the established method was linear in the range of 0.0162μg～0.162μg（r=-0.9998） for aloin and was linear in the range of 0.0066 μg～ 0.066 μg （r=-0.9997） for aloe-emodin;the average recovery was 101.13% with 1.39% of RSD for aloin and was 100.05% with 1.28% of RSD for aloin .The method was sensitive,simple and accurate.

 Key words:RP-HPLC, Aloin, Aloe-emodin, Simuhaneousdetermination

 芦荟，拉丁名为ALoe，属百合科多年生常绿肉质 植物，是大自然赐予人类的仙丹草，具有抗肿瘤、通 便、抗菌等作用¨1。芦荟苷和芦荟大黄素为芦荟的主要 有效成分，芦荟苷氧化降解分解为苷元一芦荟大黄素。 芦荟苷和芦荟大黄素各有其独特的药性 1，芦荟汁中 含有一定量的芦荟苷和芦 荟大黄素，因此测定各自 含量变化很有必要，而应 用RP—HPLC法同时测定 芦荟样品中芦荟苷和芦荟 大黄素的含量尚未见报 道。本文建立了同时测定 芦荟汁中芦荟苷和芦荟大 黄素的含量的方法，简便 快速，得到了满意的效果。

 芦荟苷

 1 实验部分

 1．1仪器、试剂与材料

 Waters2996型HPLC仪(美国Waters公司)； K0— 250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有 限公司)。

 芦荟苷、芦荟大黄素生产供应商：长沙上禾生物  www.staherb.com

 甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水。

 芦荟汁(沈阳某公司提供)。

 1．2色谱条件

 色谱柱为YWGC18(200ram x 4．5mm，5 m)；流 动相：甲醇一水(55：45)；流速：1mL／min；检测波 长：225nm；柱温：3O℃。

 1．3 标准曲线的制备及最低检测限

 分别精密称取芦荟苷和芦荟大黄素各5．6mg、 3．3mg，定容稀释，然后混合成同时含有芦荟苷和芦荟大黄素的标准溶液，芦荟苷浓度为l6．2 咖L，芦荟 大黄素浓度为6．6 IxK／mL．分别进标样lO ，8 ， 6 ，4 IxL，2 IxL，l ，根据进样量(Y)与吸收 面积fx)作标准曲线，得回归方程，芦荟苷：Y：7．27 X 10—7X一3．1 X 10—4 r=-0．9998，线性范围：0．0162 ～ 0．162 。芦荟大黄素：Y=I．85 X 10—7X一2．74 X 10 — 5 r=0．9997，线性范围：0．0066 ～0．066 。

 在选用的色谱条件下，用浓度稀释法(mg／L)l，0． 5，0．2，0．1，0．05，0．02，按信噪比为3时，即以噪声 的3倍峰高时所对应的芦荟苷和芦荟大黄素含量为最 低检测限，浓度分别为0．08 mg／L和0．05 mz-／L，换算成 绝对进样量为0．8ng和O．5ng，说明方法的灵敏度较高。

 1．4 样品测定方法

 直接采用原汁进样(孔径0．45 m的滤膜过滤)， 进样量lO ，测其吸收面积(n=3)，然后按照标准 曲线中的回归方程计算其含量，并进一步换算成样品 中芦荟苷和芦荟大黄素体积百分含量。芦荟汁色谱图 见图1。

 图1芦荟汁色谱分离图

 1：芦荟苷2：芦荟大黄素

 2 结果与讨论

 2．1 检测波长的选择

 作者采用以甲醇为溶剂，对芦荟苷、芦荟大黄素进行紫外一可见扫描，芦荟苷在225，269，298， 359nm有吸收峰，芦荟大黄素在225，254，436nm处有 吸收峰，其中均以225nm吸收值最高，因此建立了一 种同时测定芦荟样品中芦荟苷和芦荟大黄素的高效 液相色谱分析方法，即把检测波长定在225nm处可 以同时测定芦荟苷和芦荟大黄素的含量。

 2．2 方法精密度实验

 取某一浓度对照品，测其吸收面积(进标样 l0 ，n=6)，计算精密度，结果芦荟苷RSD为1．24％， 芦荟大黄素RSD为1．05％

 2．3对照品稳定性实验

 把对照品放在冰箱中存放(4cIC)，分别在0、2、 4、8、12、24h测同一浓度样品的吸收面积(进标样l0 L，n=6)，芦荟苷峰面积的RSD为1．9l％，芦荟大黄 素峰面积的RSD为1．76％，表明对照品溶液在24h内 基本稳定。

 2．4 加标回收率实验

 在已测得芦荟苷、芦荟大黄素含量的芦荟汁样品 中加入一定量的芦荟苷和芦荟大黄素标品，按照测定 方法，测其吸收面积，换算成质量，并进行回收率计 算。芦荟苷：平均回收率为101．13％，RSD为1．39％。 芦荟大黄素：平均回收率为100．05％，RSD为1．28％。

 2．5 方法重复性实验

 对同一批号的芦荟汁平行测定6次，测其吸收面 积，得其相对标准偏差，芦荟苷：1．13％芦荟大黄素： 1．18％。表明此方法能够重复操作。

 2．6 样品测定结果与分析

 对不同生产日期(批号)的芦荟汁进行芦荟苷和 芦荟大黄素含量的测定，结果列于表1：

 表1不同批号芦荟汁中芦荟苷和芦荟大黄素的测定结果(n=3)

 分析不同批号芦荟汁中芦荟苷、芦荟大黄素的含 量可知，随着芦荟汁的保存时间的增加，芦荟苷的含 量不断减少，而芦荟大黄素的含量相应的不断增加， 原因在于：芦荟原汁长久放置，其中芦荟苷被氧化分 解，一部分变成了芦荟大黄素，所以导致了以上结果。

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