洋甘菊提取物芹菜素对大鼠缺血再灌注肝脏的保护作用 |
发布时间:2014-12-20 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2191 |
摘 要:目的观察洋甘菊提取物芹菜素Apigenin对大鼠缺血再灌注肝脏损伤的防护作用。方法 雄性SD大鼠 ,随机分为假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和I/R加洋甘菊提取物芹菜素处理组。肝脏缺血再灌注后 ,分别观察血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化,同时分析肝 组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及肝组织病理学的改变。结果肝脏缺血再灌注 后,与假手术组比较,血清中AST、ALT、LDH及肝组织中MDA含量均显著增加,而S0D活性显著的降低(P 〈0.01),同时肝脏门静脉周围瘀血明显,可见不同程度的肝细胞肿胀、脂肪空泡变;经洋甘菊提取物芹 菜素处理后,与缺血再灌注组相比较,血清中AST、ALT、LDH及肝组织中MDA均降低,而S0D活性增高(P 〈0.05),同时肝脏的瘀血明显较缺血再灌注组轻,微血管未见明显损伤,窦间隙稍宽,细胞变性坏死不 明显。结论洋甘菊提取物芹菜素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用。 The Protective Effect of Apigenin on Hepatic Ischemia Reperfusion Injury in Rats Abstract:To investigate the protective effect and its role of apigenin on hepatic ischemia reperfusion injury in rats, Methods Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups: pseudo-operation normal control group, hepatic ischemia reperfusion injury model group, api- genin group, After hepatic ischemia and reperfusion, to analysis the level of ALT, AST and LDH in the serum and observe the change of MDA and SOD activity of the hepatic tissue. The injury circumstance of the liver tissue in each group was compared by HE staining. Results After hepatic ischemia reperfusion, the MDA level and the content of ALT, AST and LDH increased, and the SOD activity decreased obvi-ously comparing with the normal group (P〈0.01) ; Comparing to the hepatic isehemia reperfusion injury model group, the MDA level and the content of ALT, AST and LDH decreased, and the SOD activity increased (P〈 0.05). The change could be also observed by the optical microscope which liver cell injury of the apigenin groups was evidently slight than that of the hepatic isehemia reperfusion injury model group. Conclusions The apigenin have a prominent protective effect on hepatic isehemia reperfusion injury in rats. Key words:Apigenin Ischemia reperfusion Liver Antioxygen 肝脏缺血再灌注损伤是肝脏手术过程中常见一 种病理生理变化,可产生氧自由基,损伤肝细胞超微 结构 ,影响肝脏的功能口]。因此,在临床的肝脏手术 中,如何减轻肝脏缺血再灌注损伤的程度,是目前研 究 的热点。洋甘菊提取物芹菜素是一种天然多酚类化合物,近年 来研究发现,它是一种天然的抗氧化剂,具 有明显的 抗氧化作用,可消除体内过多的自由基,保护细胞膜 的结构口]。本实验通过建立大鼠肝脏局部 缺血再灌 注模型,经洋甘菊提取物芹菜素处理后,观察血清中谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶(AST)及乳 酸脱氢酶(LDH)含 量的变化,同时分析肝组织中丙二醛(MDA)含量和 超氧化物歧化酶(S0D)的活性及肝组织 病理学的改 变,从而探讨洋甘菊提取物芹菜素对大鼠缺血再灌注肝脏损伤的保护作用。 1 材料与方法 1.1 材料 雄性SD大鼠60只,体重1 80~2 20 g,由哈尔滨医科大学附属二院实验动物中心提 供;MDA、SOD试剂盒 由南京建成生物工程研 究所提供;洋甘菊提取物芹菜素购自中国药品生物制品检定所。 1.2 动物分组与模型建立 建立大鼠肝脏局部缺 血再灌注模型is],手术前禁食I2 h,腹腔注射4 戊 巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉,腹 正中切El,暴露肝门 部,用血管夹夹闭门静脉和肝动脉,造成7O 肝脏缺 血。70 min后去除血管夹,恢复 缺血肝血流,关腹. 实验动物随机分为3组:假手术组,给予开腹及 暴露肝蒂处理,不阻断肝脏血流;缺血再灌注组,肝 门 阻断,缺血70 min后,再灌注12O min;洋甘菊提取物芹菜素治疗组动物,手术前5天,每天El服灌胃2O mg /kg的芹 菜素,再阻断肝门,缺血70 min后,再灌注12O min。各组动物分别在再灌注后120 min,通过静 脉取血, 并取肝脏标本,待测。 1.3 指标测定 1.3.1 血清中生化指标的检测 血液标本,加入抑 肽酶,静置约20 min,2 000 r/min,离心10 min,提取 血清标本,一2O℃保存。生 化仪检测血清中AST、 ALT、LDH含量的变化。 1.3.2 肝脏组织中MDA、SOD含量的变化 低温 保存的盱组织,加入1 mol/L的HC1,碾磨制成组织 匀浆.s 000 r/min,离心10 min,取上清液 ,按试剂盒 说明用硫代巴比妥酸比色法测定MDA、黄嘌呤氧化 酶法测定SOD的活性变化。 1.3.3 肝组织病理学观察 肝脏组织,通过1 0 甲醛溶液固定,按病理学常规制片,HE染色,光学显 微镜观察肝脏组织病理学的改 变。 1.4 统计处理 所有数据均以均数±标准差(x± s)表示,采用SPSS 10.0软件包进行统计学处理,P < 0.05。 2 结果 2.1 血清中生化指标的变化 缺血再灌注后,与假 手术组相比,血清中AST、AI T、LDH 含量均显著 增加(P< 0.01);经洋甘菊提取 物芹菜素处理后,血清中AST、 ALT、LDH 含量与缺血再灌注组相比均降低(P< 0.05)。见表1。
注:*与正常组相比,P< 0.O1;**与缺血再灌注组相比,P< 0.05。 2.2 肝组织中MDA、SOD活性的变化 缺血再灌 注后,与假手术组相比,肝组织中MDA含量显著增 加,而SOD活性显著降低(P< 0.01);经洋甘 菊提取物芹菜素处 理后,与缺血再灌注组相比较,肝组织中MDA含量 显著降低,而SOD活性显著增加(P< 0 .01)。见表 2。
注:*与正常组相比,P< 0.01;** 与缺血冉耀注组相比,P< 0.05。 2.3 肝细胞形态学改变 光镜下,假手术组肝细胞 及肝窦内皮细胞均正常(图1见封四);缺血再灌注 组,肝脏门静脉周围瘀血明 显,可见不同程度的肝细 胞肿胀、脂肪空泡变,偶可见灶性坏死(图2见封 四);洋甘菊提取物芹菜素组再 灌注后,肝脏的瘀血明显较缺血再 灌注组轻,微血管未见明显损伤,窦间隙稍宽,细胞 变性坏死不明显 ,仍可见单个细胞坏死 肝脏缺血再灌注损伤的发病机制目前尚不完全 清楚,研究表明,氧自由基、脂质过氧化在肝脏缺血 再灌 注损伤的过程中起着重要的作用。氧自由基是 一种含未配对电子的化学基团,具有高度的不稳定 性,对 蛋白质、脂肪及核酸等生物活性物质具有损伤 作用。在肝脏缺血再灌注过程中,发生超氧化物阴离子自由 基反应,可产生大量氧自由基,导致脂质过 氧化反应,造成肝细胞肿胀、变性、坏死I4 ]。MDA 能反应细 胞膜脂质过氧化的程度,间接反映出细胞 损伤的程度。此外,氧自由基清除剂SOD,可以间接 的反映体内 氧自由基水平及脂质过氧化的损伤程 度 ]。洋甘菊提取物芹菜素是一种天然多酚类化合物,具有抗自 由 基损伤、抑制血小板活化与聚集、扩张心血管、降 低心肌耗氧、改善心肌代谢和心脏功能等众多药理 作 用,对内皮细胞也具有一定的保护作用. 肝脏缺血再灌注后,与假手术组比较,光镜下可 见肝脏门静脉周围瘀血明显,可见不同程度的肝细 胞肿 胀、脂肪空泡变,同时血清中AST、AI T、LDH 及肝组织中MDA含量均显著增加,而SOD活性显 著的降低, 表明肝细胞在缺血再灌注期间氧自由基 生成增加,肝脏细胞受到了自由基的攻击,机体清除 自由基的能 力下降;经洋甘菊提取物芹菜素处理后,与缺血再灌注 组相比较,肝脏的瘀血较缺血再灌注组明显减轻, 微 血管未见明显损伤,窦间隙稍宽,细胞变性坏死不明 显,而且血清中AST、ALT、LDH 及肝组织中MDA 均降低,而SOD活性增高,表明洋甘菊提取物芹菜素可以抑制肝 脏缺血再灌注后SOD的失活,降低细胞内氧 自由基 含量,使MDA生成下降,从而抑制大鼠肝组织的脂 质过氧化反应。 本研究结果表明,洋甘菊提取物芹菜素Apigenin可能通过拮抗脂质过 氧化反应,清除自由基的生成等途 径,减轻缺血再灌 注所造成的肝脏损伤,从而保护肝组织的功能,为临床 中缺血再灌注损伤性疾病的防 治提供了新的思路。 上禾生物 www.staherb.cn www.staherb.com |