HPLC检测独一味分散片中木犀草素的含量 |
发布时间:2014-08-05 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:1923 |
HPLC法测定独一味分散片中木犀草素的含量 关键词:独一味分散片 木犀草素 独一味 1 仪器与试药 岛津高效液相色谱仪,SPD·lOAvp紫外检测器,Lc- 10ATvp输液泵,浙江大学N一2000双通道色谱工作站,AS3120 超声波清洗机,METrLER AG135电子天平。木犀草素对照 品:购自中国药品生物制品检定所,批号111520-200201;独一 味分散片:广西万山红有限公司提供批号040601、040602、 040603;甲醇为色谱纯,磷酸、盐酸为分析纯,水为双蒸水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱:VP-ODS(4.6 mE×150 mm,5 um); 流动相:甲醇-0.4% 磷酸溶液(50:50);流速:1.0 ml·min一; 柱温:30℃ ;检测波长为350 nm。 2.2 试液的制备 2.2.1 供试品溶液的制备取本品20片,研细,取0.9 g,精 密称定,置25 ml量瓶中,加2.5 mol·L 盐酸甲醇溶液20 rnl,超声处理30 min,放冷,用2.5 mol·L 盐酸甲醇溶液稀 释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液10 ml,置50 ml圆底 烧瓶中,于90℃水浴中加热水解30 min,放冷,转移至25 m1 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。 2.2.2 阴性对照溶液的制备照处方比例称取辅料,预胶化 淀粉2.05 g、交联聚维酮0.70 g、交联羧甲基纤维素钠0.70 g、阿司帕坦0.05 g,硬脂酸镁适量,按供试品溶液的制备方法 制备阴性对照溶液。 2.2.3 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥过 夜的木犀草素对照品9.10 mg,置200 ml量瓶中,加甲醇溶解 并稀释至刻度,摇匀,即得对照品贮备液(45.50 mg·L )。 精密吸取对照品贮备液5 m1,置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至 刻度,摇匀,即得(22.75 mg·L )。 2.3 系统适用性试验分别取供试品溶液、对照品溶液、阴 性对照溶液,按上述色谱条件实验,对供试品峰和对照品峰的 系统适应性参数进行考察,槲皮素的理论塔板数为5317,分 离度为R。=2.4、R:=3.3,阴性无干扰(见图1)。 2.4 线性考察精密吸取对照品贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 m1分别置l0 ml量瓶中,各加甲醇稀释至刻度,摇匀,即 得。分别精密吸取上述溶液各10 l,注入液相色谱仪,按上 述条件测定,峰面积分别为:163961、496966、819395、 1162344、1468462。以木犀草素对照品进样浓度C(mg·L ) 为横坐标,峰面积积分值A为纵坐标,进行线性回归,得回归 方程为:A=35982C+3630.6,r:0.9999(n=5)。结果表明:槲皮素进样浓度在4.55~40.95 mg·L 范围内,与峰面积 积分值呈良好的线性关系。 2.5 进样精密度试验精密吸取对照品溶液l0 l,连续进 样5次,记录色谱图与峰面积,峰面积分别为:756791、 756893、755329、750309、755433,其RSD=0.4%(n=5),精密 度较好。 2.6 重现性试验取独一味分散片(081201),分别制备5份 供试品溶液,按上述色谱条件测定木犀草素的含量,峰面积分 别为:700959、706426、698356、700188、696796,测得平均每片 含量为0.768 mg,其RSD=1.1%(n=5),重复性良好。 2.7 稳定性试验取上述供试品溶液,分别于0、2、4、8、12、 24 h进样10 l,记录色谱图,量取峰面积,峰面积分别为: 705914、707100、702811、702036、700225、699646,其RSD = 0.5%(n:5),实验表明供试品溶液在24 h内稳定。 2.8 加样回收试验取已知含量的同一批号样品(批号: 081201,含量为0.768 mg·L~ ·片 )6份(每份约0.5 g), 置25 ml量瓶中,分别精密加入3 ml木犀草素对照品溶液 (206.2 mg·L ),按上述”供试品溶液的制备”方法制备。 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 l,注入液相色 谱仪,记录色谱图,量取峰面积,计算,测得木犀草素的平均回 收率为100.3% ,RSD=1.3% ,结果见表1 2.9 样品测定将本品三批样品,照“2.2.2”项下方法制得 供试品溶液。分别取对照品溶液及供试品溶液10 l进样。 按外标法计算槲皮素含量。结果得批号081201、081202、 081203样品的含量分别为每片0.770、0.679、0.750 mg。 3 讨论 独一味分散片系独一味提取制成的制剂,独一味含有多 种黄酮类化合物:木犀草素、木犀草素-7—0一葡萄糖苷、槲皮 素、槲皮素一3—0 阿拉伯糖苷、芹菜素-7—0一新陈皮糖苷等。为 了控制产品内在质量,保证临床用药的有效性,我们参照“独一味胶囊”药品标准及其2005年版药典采用HPLC法测定木 犀草素(C H 0 )含量。我们比较了甲醇-水,乙腈-水,和不 同浓度的磷酸一甲醇流动相系统的分离效果,乙腈-水体系分 离效果较差,很难将样品中的木犀草素与其他成分分开,甲 醇一水系统用磷酸溶液调pH后分离效果明显改善,经试验发 现以甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)时,分离效果最好。对甲 醇、水、不同浓度的盐酸水溶液、不同浓度的盐酸甲醇溶液,作 为提取溶剂进行考察,2.5 tool·L 盐酸甲醇溶液好于其他 提取溶剂。对供试品加入2.5 tool·L。盐酸甲醇溶液溶液, 分别放人80~C,90E,95E,100~C水浴中加热水解。结果发 现90qC时水解得更彻底,温度再升高木犀草素苷元峰面积趋 于减少,故选择这个温度。观察发现水浴30 rain时木犀草素 峰面积最大。取木犀草素对照品溶液在190—400 nm的波长 范围内进行光谱扫描。根据木犀草素的紫外吸收,选择了 350 tim作为检测波长。在此条件下木犀草素分离效果好。 实验表明采用本方法直接测定独一味分散片中木犀草素的含 量,分离完全,方法简便、快速、准确度好,精密度高,可作为该 制剂的质量控制。 木犀草素 长沙上禾生物 www.staherb.com |