白藜芦醇是存在于葡萄皮、花生及中药虎杖等植物中一种非黄酮类多酚化合物，既往研究显示其可减轻急性心肌梗死(AMI)后缺血一再灌注损伤.。2009年5月，我们观察了白藜芦醇对AMI后血管新生、冠状动脉侧支循环的影响，旨在进一步探讨其保护心血管系统的作用机制。

1 材料与方法

1．1 材料新西兰大耳白兔(雌雄不拘)32只，体质量(2 500 550)g，由徐州医学院动物中心提供；白藜芦醇，长效消心痛；血管内皮生长因子(VEGF)抗体，促血管生成素．1(Ang一1)抗体，CD 抗体。

1．2 动物分组及处理将32只兔随机分为四组各 8只，B、C、D三组均参考蒋清安等 的方法并加以改进建立AMI模型，具体方法：32只兔称重后按照 4 ml／kg予10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，仰卧位固定于手术台，用手术剪沿胸骨正中打开胸腔3～4 cm，充分暴露术野，于左房下缘下1—2 cm处用5／0 无创伤缝合线结扎与心大静脉伴行的左前降支，观察心肌颜色变化，同时描记心电图，心肌由鲜红色变为暗红色、sT段弓背向上抬高>0．5 mV时表明 AMI模型制作成功；A组为假手术组，除不结扎左前降支外余步骤同上。各组均于术后24 h行下列处理：A、B组予生理盐水3 ml灌胃1次／d，C组予长效消心痛2．4 mg／kg+3 ml生理盐水灌胃1 次／d，D组予白藜芦醇3 mg／kg+生理盐水3 ml灌胃1次／d。各组均持续给药15 d后处死实验动物，留取心肌标本，于一80 保存或4％福尔马林固定后制作石蜡切块。

1．3 相关指标检测①梗死面积：将各组心肌组织石蜡切片(厚度4 m)经HE染色，显微光镜10× 视野下观察心肌坏死情况，采集图像，用Image pro plus 6．0图像分析系统测量切片上心外膜表面瘢痕区弧长，同时测量整个心脏外膜弧长，每个切面心肌梗死面积=疤痕区弧长／心脏外膜弧长×100％。② 梗死边缘区微血管密度(MVD)：按文献 将梗死心肌周边2 InlTl范围界定为梗死边缘区。微血管判定-4 J：以CD 标记血管内皮，凡是染成棕黄色的血管内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个血管计数，凡管腔>8个红细胞大小、带有较厚肌层的血管区域血管均不计数。显微镜400×视野下，每张切片随机选取5个视野计数梗死边缘区新生血管数 (MVC)，取其平均值，每视野下MVC即为MVD。③ 梗死边缘区VEGF及Ang一1蛋白表达：分别采用免疫组化法及Western blot法检测。取梗死边缘区心肌组织石蜡切片、常规脱蜡至水并行免疫组化染色，应用显微镜在相同光源强度下于400×视野每张切片随机选取梗死边缘区5个视野的图像，通过Image pro plus图像分析软件检测其平均光密度值(OD)，将一8O℃冻存组织裂解，标定总蛋白浓度后按常规 Western blot方法行凝胶电泳一转膜一封闭一加一抗、一4℃过夜一加二抗一显色，结果条带进行灰度值分析。

1．4 统计学方法应用SPSS 13．0统计软件进行统计学处理。计量数据以用x±s表示，分别行正态性检验、方差齐性检验和单因素方差分析(ANO．VA)，P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 一般情况32只兔中成功制备AMI模型并存活至治疗结束27只，总存活率为84．4％。共有5 只于术中、术后死亡，原因分别为气胸、感染、心衰、恶病质等。

2．2 两组相关指标测定梗死面积、MVD及梗死边缘区VEGF及Ang一1蛋白表达见表1，Western blot法所测VEGF及Ang一1蛋白表达见图1

3 讨论

研究显示，白藜芦醇可通过抗氧化、清除氧自由基、抑制血小板聚集、调节血脂、防止动脉粥样硬化及促进冠脉舒张、增加机体耐缺氧储备等发挥心血管保护作用_3 J。冠脉侧支循环建立包括原有侧支开放和新侧支形成，其能减轻心肌缺血坏死、预防和延缓缺血性心脏病和室壁瘤形成、改善临床症状和预后。AMI后冠脉原有侧支开放的程度有限，不足以代偿机体的需要；而血管新生促侧支循环形成则具有重要意义。大量研究表明，多种血管生长因子包括VEGF、成纤维细胞生长因子、Ang一1、转化生长因子一、肝细胞生长因子、血小板源性生长因子、黏附分子一I等，均参与心肌缺血缺氧环境下诱发的血管新生过程，其中VEGF是已知促进血管内皮细胞增殖、血管管腔形成最强有力的生长因子，与新生血管的形成关系密切；而Ang一1主要由血管平滑肌细胞和血管周围细胞分泌，与其受体Tie-2结合后具有不依赖于VEGF而对血管生成后期血管内皮细胞稳定和新生血管成熟起调节作用的特性l4 J，进而有利于形成有效的侧支循环。

“治疗性血管再生”指通过人为增加心肌局部血管生长因子浓度刺激心肌缺血区新生血管及侧支循环形成，以达到改善心肌缺血的目的，即心肌缺血区的“自我血管搭桥”。目前所用方法主要包括通过体内、体外途径给予外源性生长因子及转基因治疗等。由于生长因子体内半衰期短、价格昂贵及转基因治疗安全性等问题，应用药物促进血管新生的疗法正逐步引起重视。以往研究表明，硝酸脂类药物对侧支循环开放及新生血管形成 具有一定作用。本研究显示，C组和D组心肌梗死面积明显小于B组，梗死边缘区MVD及VEGF、Ang一1蛋白表达显著高于B组；C 组梗死边缘区Ang一1蛋白表达显著低于D组。提示 白藜芦醇和长效消心痛均可促进AMI后新生血管及侧支循环形成，前者促进血管新生的机理可能与其诱导缺血心肌上调VEGF、Ang一1表达有关；后者作为机体内NO的直接供给体可能发挥了不同于白藜芦醇 的促血管生成作用。笔者认为，有待行新生血管功能测定以进一步评估侧支循环有效性及深入探讨白藜芦醇与消心痛不同的作用机制；既往有文献报道大剂量白藜芦醇对肿瘤血管生成有抑制作用，本实验仅行小剂量口服给药实验，故白藜芦醇适宜的给药剂量及途径亦有待进一步研究。

综上所述，白藜芦醇可促进AMI后心脏血管新生及冠脉侧支循环形成，可作为不能耐受硝酸酯类药物且不适于介入、外科搭桥术冠心病患者的替代药物。

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