厚朴酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究 |
发布时间:2013-12-09 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:1683 |
摘 要:厚朴酚(magnolo)是从中药厚朴中提取的一种含有酚羟基的生物活性物质,具有明显镇静、镇痛、延长睡眠、止泻、降压等作用,而且有保护化学药物缺氧诱导的皮质神经细胞损伤作用。该研究旨在观察厚朴酚对大鼠实验性脑缺血再灌注损伤的保护作用. 关键词:厚朴酚 局灶性脑缺血 自由基 一氧化氮 1 材料和方法 1.1 材料 (1)动物:SD大鼠9O只,17~ 18周龄,雌雄各 半,体重250~3O0 g,由湖北省实验动物中心提供。(2)试 剂和仪器:按文献[2]方法提取厚朴酚,超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶 (NOS)及考马斯亮蓝试剂盒均为南京建成生物工程研究所 产品,TGI 一16型高速台式离心机由上海医用分析仪器厂生 产,722一型分光光度计由上海精密科学仪器有限公司生产。 1.2 方法 1.2.1 大鼠局灶性脑缺血模型制备:采用颈内动脉线栓 法制备大鼠大脑中动脉闭塞(McA0)模型 取SD大鼠9O 只,分两批进行处理,第一批进行行为学观察和病理学检 查,第二批进行s0D、MDA、N0 、NOS检测。每批分为5 组.即假手术组、模型组和厚朴酚按体重25、50、100 mg/kg 组(假手术组为第一、二批共用组),每组1O只。厚朴酚组 动物于手术前分别按体重25、50、100 mg/kg静脉注射厚朴酚3 mL,假手术组及模型组均静脉注射生理盐水3 mL,,1 次/d。第3 d给药2O rain后,将大鼠用2O (质量浓度)的乌拉坦按体重1 g/kg麻醉,仰卧固定于手术台上,行颈部正中切口分离右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉.暂时夹闭颈总动脉、颈外动脉,在颈总动脉分叉下方剪一切口,将 一预先用酒精灯烧成圆头的尼龙线(直径为0.26 ram)插 入颈内动脉至大脑中动脉起始端,进线深度距颈内、颈外动脉分叉处18~2O mm左右可感到阻力,阻断右侧大脑中动 脉血流,2 h后抽出尼龙线,扎紧动脉残端,缝合皮肤,予以 再灌注24 h。假手术组大鼠仅暴露颈内外动脉分叉,不闭 塞大脑中动脉。 1.2.2 神经病学评分:参考Zealonga的5分制评分标准 ],分别于缺血再灌注后3、6、24 h进行评分。0分:无神 经损伤症状;1分:不能完全伸展对侧前肢;2分:向外侧转 圈;3分:向对侧倾倒;4分:不能独自行走,意识丧失。 1.2.3 生化指标测定:再灌注24 h后处死大鼠,迅速取脑 称重。用生理盐水制成1O 脑组织匀浆液,低温离心,取 上清液。按试剂盒说明书分别测定SOD、MDA、NO、NOS, 按考马斯亮蓝法标定蛋白含量。 1.2.4 统计学处理:实验数据输入SPSS 10.0软件进行t 检验。 2 结果 2.1 厚朴酚对局灶性脑缺血大鼠脑组织MDA、SOD、NO、 NOS的影响:与假手术组相比,模型组大鼠脑组织中s0D 活性明显降低,MDA、NO含量及NOS活性明显增加(P< 0.05);与模型组相比,厚朴酚组大鼠脑组织中SOD活性明 显升高,NOS活性降低,MDA、NO含量明显减少(P<0.05)(表1)。 表1 厚朴酚对局灶性脑缺血大鼠脑组织MDA、SOD、NO、NOS的影响 Table 1 Efect of magnolol on MDA。SOD,NO,NOS of brain tissue in MCA0 rats 2.2 厚朴酚对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响:脑缺血 再灌注3、6、24 h时模型组和厚朴酚组大鼠神经功能缺损积分均较假手术组增高(P< 0.05);厚朴酚组与模型组比较,缺血再灌注3、6 h时积分明显降低(P<0.05),24 h时 差异无统计学意义(表2)。 2.3 病理学检查 假手术组脑组织神经元及胶质细胞形态正常,无核肿胀,未见神经细胞变性、坏死及中性粒细胞 浸润等病理改变。模型组镜下脑灰质和白质疏松,血管周围间隙加宽,此外脑组织中均见神经元结构模糊,胞体肿 胀,出现不同程度的核固缩、核碎裂、核溶解,核体不规则,并可见软化灶及中性粒细胞浸润。厚朴酚组与模型组相 比,厚朴酚剂量依赖性地改善大脑神经细胞的胞体肿胀及核固缩、核溶解程度,减少软化灶形成及中性粒细胞浸润。 表2 厚朴酚对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响 Table 2 Effect of magnolol on neurologic deficit in M CAO rats * P< 0.05 compared with sham group:/X P< 0.05 compared with ischemia group 3 讨论 缺血性脑血管疾病是临床常见病和多发病,且预后较差。近年来研究发现,脑缺血再灌注损伤与NO、氧自由基 等有关。NO 由NOS催化左旋精氨酸生成,根据组织中 NOS活性高低可判断NO 的含量,已有多方面证据表明脑 缺血再灌注后产生的大量NO 对神经细胞具有毒性作用。NO作为自由基与超氧阴离子自由基反应生成的硝基过氧 化物(ONNN一)是一种极强的氧化剂,能直接氧化脂质造 成细胞严重损伤 ]。该研究中,缺血再灌注后脑组织NOS 活性及NO含量均明显升高,而厚朴酚能明显降低缺血再 灌注后大鼠脑组织NO含量。SOD是内源性氧自由基清除 剂,正常情况下可与体内其他内源性氧自由基清除剂一同清除体内代谢产生的氧自由基。MDA是脑组织内过氧化 脂质的主要代谢产物之一。厚朴酚可明显提高缺血再灌注 损伤大鼠脑组织中SOD 活性.并减少脂质过氧化产物 MDA的生成,从而表现其抗氧化特性。该研究进一步发 现,厚朴酚能有效地改善大鼠脑缺血再灌注后出现的行为 功能障碍以及提高肌张力;通过病理组织学检查发现,厚朴酚可改善脑细胞损伤,减轻胞体肿胀及核固缩、核溶解程 度,减少软化灶形成及中性粒细胞浸润。因此,可认为厚朴酚对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与其显著的 抗组织自由基损伤及抗NO神经毒作用有关。关于厚朴酚 增强S0D活性的机制尚有待进一步研究。 |