HPLC法测定博落回提取物中氯化血根碱、氯化白屈菜红碱含量的操作规程

本标准规定了高效液相法测定氯化血根碱、氯化白屈菜红碱含量的操作规程，适用于博落回提取物中氯化血根碱、氯化白屈菜红碱含量测定。

1  方法来源

公司自拟

2  试剂

2.1 乙腈（色谱级）

2.2 重蒸水

2.3 磷酸（A.R）

2.4 盐酸（A.R）

2.5 甲醇(A.R)

3  对照品

3.1氯化血根碱、氯化白屈菜红碱

4  仪器和用具

4.1分析天平（1/10000）

4.2玻璃仪器：100量瓶、针筒式过滤器

4.3滤膜：油膜（0.45μm）

4.4超声波发生器

4.5高效液相色谱仪

5  色谱条件

5.1色谱柱：Hypersil ODS₂ C18，5μm，4.6×250mm

5.2流动相：

A：乙腈

B：0.1%磷酸水溶液

5.3 柱  温：35℃

5.4 流  速：0.8ml/min

5.5 检测波长：270nm

5.6 进样量：10μl

6  操作步骤

6.1供试品溶液、对照品溶液的制备：

6.1.1精密称定本品约25mg,，置100ml容量瓶中，加甲醇-1.0%盐酸溶液（50:50）80ml,超声处理30分钟，取出，放冷，加上述溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

6.2对照品溶液的制备：

精密称取氯化血根碱、氯化白屈菜红碱各适量，用色谱甲醇-1.0%盐酸溶液（50:50）配制成每1ml含氯化血根碱0.1mg,氯化白屈菜红碱0.05mg的溶液，即得。

6.3将供试样试液、对照品试液各10ul,注入液相色谱仪，测定。

7  计算

氯化血根碱%=                  ×100

氯化白屈菜红碱%=  ×100

A_标：对照品图谱中氯化血根碱、氯化白屈菜红碱的峰面积

A_样：样品图谱中氯化血根碱、氯化白屈菜红碱的峰面积

C_标：对照品中氯化血根碱、氯化白屈菜红碱溶液的浓度（mg/ml）

m：样品的称重（mg）

8  注意

8.1对照品配成溶液后应避光，4℃贮存，可使用三个月。

8.2每次测定需要进行对照样的同步测定，对照样每次测定结果应在其标定值的95-105%以内。