作者：曾泽张华琦桂干北

摘要：博落回(M.cordata)是一种常用的中药,具有抗炎,抗病毒,抗氧化,抗菌,杀虫和抗肿瘤等多种生物学活性.为了探究博落回提取物对副猪嗜血杆菌(G.parasuis)诱导的猪肺泡巨噬细胞(PAM)炎症反应及NF-κB和MAPK信号通路的影响,本研究采用12.5 ng/mL,25 ng/mL,50 ng/mL,100 ng/mL和200 ng/mL的博落回提取物分别预处理PAM 4 h,再利用1×107 cfu/mL副猪嗜血杆菌刺激PAM 12 h.以博落回提取物溶剂(TSB培养液)预处理PAM再感染副猪嗜血杆菌作为感染对照组.分别提取各组细胞的RNA和蛋白质,将RNA反转录成cDNA作为模板,采用qRT-PCR检测各组细胞中IL-1α,IL-1β,IL-6,IL-8和TNF-αmRNA的转录水平.

通过western blot检测各组细胞中NF-κB信号通路蛋白p65,p-p65,IκBα和p-IκBα及MAPK信号通路蛋白JNK,p-JNK,ERK,p-ERK,p38和p-p38的表达量.结果显示,与空白对照组相比,感染对照组细胞炎性因子IL-1α,IL-1β,IL-6,IL-8和TNF-αmRNA的转录水平均显著升高(P<0.05),而不同浓度博落回提取物预处理均能够显著抑制副猪嗜血杆菌诱导炎性细胞因子mRNA的转录水平(P<0.05),且与博落回提取物的浓度呈正相关.Western blot结果显示,与空白对照组相比,感染对照组NF-κB信号通路蛋白p-p65和p-IκBα及MAPK信号通路蛋白p-JNK,p-ERK和p-p38的表达水平均显著升高(P<0.05),而不同浓度的博落回提取物预处理后均能够显著抑制副猪嗜血杆菌诱导的p-p65,p-IκBα,p-JNK,p-ERK和p-p38蛋白的表达水平(P<0.05),且基本与博落回提取物的浓度呈正相关;各组细胞中NF-κB信号通路蛋白p65和IκBα及MAPK信号通路蛋白JNK,ERK和p38的表达水平均无显著差异.本研究首次证实博落回提取物通过抑制PAM中NF-κB和MAPK信号通路的活化从而抑制副猪嗜血杆菌诱导PAM的炎性反应,为副猪嗜血杆菌病的防治提供了一种新的思路.