杜仲皮水提取物舒张大鼠离体胸主动脉环的作用及机制

摘要：

目的 探讨杜仲叶提取物对人体内腹部脂肪蓄积的抑制作用.方法 将27例腹型肥胖患者随机分为2组(试验组15例,对照组12例),分别口服杜仲胶囊(含杜仲叶提取物)及安慰剂胶囊,第8周末观察每组患者体重、腹围、体重指数(BMI)、皮下脂肪及内脏脂肪的变化.结果 试验组与对照组比较,内脏脂肪及皮下脂肪明显减少(P＜0.05),体重降低,腹围显著减少(P＜0.001),BMI亦显著下降(P＜0.01).结论 杜仲叶提取物能明显抑制腹部脂肪蓄积,减轻腹型肥胖状态,可作为治疗腹型肥胖的基本用药

Abstract：

Objective To investigate the depressant effect of Eucommia ulmoides leaves extract on human abdominal fat.Methods Twenty-seven patients with abdominal obesity were randomly divided into two groups( experimental group included 15 patients and control group included 12 patients),and were given oral Eucommia capsule( containing Eucommia ulmoides leaves extract) and oral placebo capsule respectively.Observed the change of weight,abdominal circumference,body mass index( BMI ),visceral fat and subcutaneous fat of patients in each group after 8 weeks.Results Compared with control group,the visceral and subcutaneous fat of the experimental group decreased significantly ( P ＜ 0.05 ),the weight and abdominal circumference of the experimental group decreased remarkably ( P ＜ 0.001 ),and BMI of the experimental group also decreased remarkably( P ＜0.01 ).Conclusions The Eucommia ulmoides leaves extract significantly inhibited the accumulation of abdominal fat and abdominal obesity,and could be used as the basic drugs to treat abdominal obesity.

杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.；Du-zhong）是传统中药， 祖国医学认为其具有补肝肾， 强筋骨，安胎之功效[1] 。杜仲的化学成分复杂，主要含木脂素类，环烯醚萜苷类，挥发油，多糖，氨基酸，有机酸，甾醇，磷脂，维生素，微量元素以及硬性胶等，其中以木脂素类和环烯醚萜苷类研究为多 [2] 。

杜仲的药理作用非常广泛，能抗炎、抗病毒、调节免疫，对多种疾病有很高的价值，尤其在治疗高血压方面，杜仲被认为是现在世界最高质量的无副作用的天然降压药物。过去的研究认为其降压的主要成分是松脂醇二葡萄糖苷。[3] 虽然杜仲具有舒张血管降低血压的作用，然而其对离体血管的作用机制尚未十分了解，因此本实验在大鼠离体胸主动脉环灌流模型的基础上，通过观察杜仲皮提取物对内皮完整和去除内皮的血管环张力的影响，探讨其对血

管平滑肌的作用及可能的机制。

1  材料与方法

 1.1   设备  离体血管环灌流装置，JZJ01 型肌力换能器，HSS－1B 型数字式超级恒温浴

RM6240B 型多道生理信号采集处理系统，均都仪器厂产品。

1.2   药物与试剂   苯肾上腺素（PhenylephPE） ，乙酰胆碱（Acetylcholine，Ach） ，左旋硝氨酸甲脂（N（omega）-nitro-L-methyl-eL-NAME） ，吲哚美辛（Indomethacin，In1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-alpha]quinoxalin-1-on(ODQ)， 格列苯脲 （Glibenclamide） ， 以上均为公司产品，杜仲皮水提取物由浙江大学药学取，用 K-H液配制含杜仲提取物 20mg/ml 的Krebs-Henseleit （K-H） 液 （mmol/L） ： NaCKCL 4.7、 KH2PO4   1.2、 MgSO4 •7H2O 1.2、 N25，glucose 10、CaCL2 1.25。

1.3   血管环的制备  Sprague-Dawley（SD）雄性，体重 200－280 g，由浙江大学医学院动

验中心提供。每个大鼠的胸主动脉被分成 6 段随机分入 6个实验组进行平行研究。

具体方法为：用钝器击昏大鼠后充分放血，迅速取胸主动脉， 置于通以95％O2和5％CO2混合气体预饱和地4°C K-H液中， 去除周围结缔组织后将血管剪成约3~4mm的血管环，避免过度牵拉，以防损伤内皮。根据实验需要，去除血管内皮时，用镊子磨擦血管环内表面以去除内皮细胞。将血管环悬挂于预置10ml K-H液的浴槽内，37°C恒温，持续通以95

％O2和5％CO2的混合气体。静息张力0g稳定血管30min，每隔15min换一次K-H液，此后调节静息张力为2g，稳定稳定1h，期间每隔15min换一次K-H液。用3M的KCL重复刺激3次，以诱发血管的最大收缩幅度。待血管稳定后，用10-4 mol/L PE预收缩血管环达峰值，加入10-3 mol/L Ach检验内皮的完整性。加入Ach后使PE预收缩的血管环舒张60％~90％，认为内皮完整，反之，认为内皮被破坏。 实验用 RM6240B 型生物信号采集处理系统记录血管张力的变化， 分别以末次KCL （终浓度6×10-2 mol/L） 、PE（终浓度 10-8

mol/L）刺激引起的最大收缩幅度为标准，以加入药物后的血管张力幅度与之相比所得百分比比值表示。

1.4   实验分组  

1.4.1   累积浓度杜仲水提取液对 PE 预收缩内皮完整的血管环的作用（有内皮组） ：实验组（n＝7） ，用 PE（10-4mol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察杜仲提取物对对 PE 预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.2   累积浓度杜仲水提取液对 PE 预收缩去内皮的血管环的作用（去内皮组） ：实验组（n＝7） ，用PE（10-4mol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、 0.4、 0.8、 1.6、 2.4、

3.2（mg/mL） ，观察杜仲提取物对 PE 预收缩去除内皮的血管环的作用。

1.4.3   累积浓度杜仲水提取液对 KCL 预收缩内皮完整的血管环的作用（KCL 组） ：实验组（n＝6） ，用 KCL（60mmol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察杜仲提取物对 KCL预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.4   L-NAME 对杜仲谁提取物作用影响组（L-NAME 组） ：实验组（n＝8） ，内皮完整的血管环用 10-4mol/L L-NAME预处理 15min 后，再用 PE（10-4mol/L） 预收缩血管， 达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察 L-NAME 预处理后杜仲提取物对 PE 预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.5   Indo对杜仲谁提取物作用影响组（Indo组） ：实验组 （n＝6） ， 内皮完整的血管环用 10-5mol/L Indo预处理 15min 后，再用 PE（10-4mol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察 Indo预处理后杜仲提取物对 PE 预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.6   格列苯脲（Glib）对杜仲谁提取物作用影响组（格列苯脲组） ：实验组（n＝6） ，内皮完整的血管环用3µmol/L格列苯脲预处理15min后， 再用PE（10-4mol/L） 预收缩血管， 达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察格列苯脲预处理后杜仲提取物对 PE 预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.7   ODQ 对杜仲谁提取物作用影响组（ODQ组） ：实验组（n＝7） ，内皮完整的血管环用10µmol/LODQ预处理15min后， 再用PE （10-4mol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终

浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察ODQ预处理后杜仲提取物对PE预收缩内皮完整的血管环的作用。1.4.8   4-AP 对杜仲谁提取物作用影响组（4-AP

组） ：实验组（n＝6） ，内皮完整的血管环用1mmol/L4-AP预处理15min后， 再用PE （10-4

mol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察4-AP预处理后杜仲提取物对PE预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.9   TEA对杜仲谁提取物作用影响组 （TEA组） ：实验组 （n＝5） ， 内皮完整的血管环用 1mmol/L4-AP预处理 15min 后，再用 PE（10-4mol/L）预收缩血管，达稳定后用累积加药法，以每 15min 加杜仲水提取液一次，使灌流液中的杜仲提取物终浓度分别

达 0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2（mg/mL） ，观察TEA 预处理后杜仲提取物对 PE 预收缩内皮完整的血管环的作用。

1.4.10  杜仲水提取物舒血管作用的时间效应组（效应组） ：实验组（n＝4） ，内皮完整的血管环用 PE（10-4mol/L）预收缩血管，达稳定后一次性加药，使灌流液中的杜仲提取物终浓度达 3.2（mg/mL） ，每隔 2min 记录一次血管环的张力，观察杜仲提取物对PE预收缩内皮完整的血管环作用的时间效应。 

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1.5   统计处理   试验结果用X ±s表示， 用MicrosoftExcel 软件处理，两组间比较采用 t 检验，多组间比较采用 ANOVA 法进行显著性检验，p<0.05 认为有显著性差异。

2  结果

2.1   杜仲皮水提取物对PE预收缩的主动脉环张力的影响 如图 1 所示， 可使如图 1所示,  杜仲皮水提取物可使 PE 预收缩的内皮完整主动脉环舒张， 与 PE 预收缩时的最大张力比较，血管张力明显降低（##p<0.01） 。且呈剂量依赖性。杜仲皮水提取物对

PE 预收缩去内皮动脉环血管张力的影响显著小于对内皮完整血管的影响（* p<0.05） ，不能很好地舒张去内皮的血管环。 杜仲皮水提取物（mg/mL）  

图 1.  杜仲皮水提取物对 PE 预收缩的主动脉环张力的影响

Fig.1  Effect of Eucommia ulmoides Oliv on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat. A: Records from experiments illustrating the effect of increasing dose of Eucommia on the tension of PE precontracted aorta rings with(right,+E)or without(underside,-E)endothelium. B:Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings with or whithout endothelium. ##p＜0.01compared with predrug  value （concentration 0） *p＜0.05 compare  PE（+E）  with  PE（－E）

2.2   杜仲皮水提取物对KCL预收缩的主动脉环张力的影响

为了观察杜仲皮水提取物是否对KCL诱导的血管收缩作用有影响，用60mmol/L的KCL收缩血管。结果表明，杜仲对KCl预收缩主动脉环张力有显著的舒张作用（##p＜0.01） ，在杜仲浓度达到3.2mg/ml时PE组和KCl组有显著差异（*p<0.05）外，其余浓度PE组和KCl组无显著差异（p>0.05） 。 （如 图2

图 2杜仲皮水提取物对 KCl预收缩主动脉环张力的影响

Fig.2   Effect of Eucommia ulmoides Oliv on tension of KCl precontracted aorta rings of  rat. Pooled data of mean normalized vessel tension obtained from KCl precontracted and PE precontracted aorta rings with endothelium .p<0.05 compared with PE（＋E）group，##p<0.01 compared with predrug  value （concentration 0）.

2.3        杜仲皮水提取物对PE预收缩L-NAME的主动脉环张力的影响 为了探讨NO-GC途径是否参与杜仲皮水提取物的血管舒张作用， 用NO抑制剂L-NAME处理内皮完整的血管环后，观察杜仲皮水提取物对血管张力的影响。L-NAME预处理后，L-NAME自身对PE诱导的血管张力无明显影响,但杜仲皮水提取物对PE预收缩的血管产生的舒张作用被抑制（图3） 。

图3杜仲皮水提取物对L-NAME处理主动脉环张力的影响

Fig 3. Effect of Eucommia ulmoides Oliv on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which have been pretreated by L-NAME.  A:  Records from experiments illustrating the effect of  Eucommia ulmoides Oliv on the phenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rat which have been pretreated by L-NAME.  B:Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by L-NAME) with endothelium.##p ＜ 0.01 compared with predrug  value （concentration 0） ，#p＜0.05 compare PE（＋E）group with L-NAME＋PE（＋E）group.

2.4  杜仲皮水提取物对PE预收缩Indo处理的主脉环张力的影响 为了探讨环氧合酶（COX）途径是否参与杜仲皮水提取物的血管舒张作用，采用内皮完整的血管环用环氧合酶抑制剂 Indo 处理后， 观察杜仲皮水提取物对血管张力的影响。Indo 预处理后，杜仲皮水提取物对 PE 预收缩的血管产生的舒张作用被减弱（#p＜0.05） ，但 Indo 处理自身对 PE 诱导的血管张力无明显影响（图 4） 。

图 4杜仲皮水提取物对 Indo 预处理主动脉环张力的影响

Fig. 4 Effect of Eucommia ulmoides Oliv on tension ophenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which havebeen pretreated by Indo.  A:  Records from experimentillustrating the effect of  Eucommia ulmoides Oliv on thephenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rawhich have been pretreated by I.  B:Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by indomethacin) with endothelium。#p＜0.05compare PE（＋E）group with Indo＋PE（＋E）group.

2.4        杜仲皮水提取物对PE预收缩ODQ处理的主动脉环张力的影响 为了探讨鸟苷酸环化酶途径是否参与杜仲皮水提取物的血管舒张作用，用鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ处理内皮完整的血管环后， 观察杜仲皮水提取物对血管张力的影响。ODQ预处理后，杜仲皮水提取物对 PE 预收缩的血管产生的舒张作用显著减弱（##p＜0.01） ，但 ODQ 自身对 PE 诱导的血管张力无明显影响

图 5  杜仲皮水提取物对ODQ预处理主动脉环张力的影响

Fig. 5  Effect of Eucommia ulmoides Oliv on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which have been pretreated by ODQ. A: Records from experiments illustrating the effect of  Eucommia ulmoides Oliv on the phenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rat which have been pretreated by ODQ.B：Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by ODQ) with endothelium. ##p＜0.01 compare PE（＋E）group with ODQ＋PE（＋E）grou2.6

 杜仲皮水提取物对PE预收缩TEA处理的主动脉环张力的影响

为了研究杜仲皮水提取物的血管舒张作用是否通过 Ca2＋敏感性 K＋通道发挥作用，用 Ca2＋敏感性 K＋通道抑制剂 TEA处理内皮完整的血管环后，观察杜仲皮水提取物对血管张力的影响。TEA预处理后，杜仲皮水提取物对 PE 预收缩的血管无明显舒张作用（p>0.05） ，且 TEA处理自身对 PE 诱导的血管张力无明显影响。

图 6杜仲皮水提取物对四乙胺（TEA）预处理主动脉环张力的影响

Fig. 6 Effect of Eucommia ulmoides Oliv on tension of phenylephrine(PE) precontracted aorta rings of rat which have been pretreated by TEA. A: Records from experiments illustrating the effect of  Eucommia ulmoides Oliv on the phenylephrine(PE) precontracted tension of aorta rings of rat which have been pretreated by TEA.B: Pooled data of mean normalized vessel tension obtained form PE precontracted aorta rings(pretreated by TEA) with endothelium. p ﹥0.05compare PE（＋E）group with TEA＋PE（＋E）group。 

2.7  杜仲皮水提取物对PE预收缩Glib处理的主动脉环张力的影响

为了研究杜仲皮水提取物的血管舒张作用是否通过 ATP敏感性 K＋通道发挥作用，用 ATP敏感的 K＋通道抑制剂格列本脲（Glib）处理完整的血管环后，观察杜仲皮水提取物对血管张力的影响。处理后，杜仲皮水提取物对 PE 预收缩血管的舒张作用未被明显减弱（p>0.05） ，且格列本脲（Gli）处理自身对 PE 诱导的血管张力无明显影响。