酶法水解黄芪皂苷糖基制备黄芪甲苷 |
发布时间:2023-01-19 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:349 |
酶法水解黄芪皂苷糖基制备黄芪甲苷:
a.黑曲霉菌(Aspegillusniger)在含5%麦芽水浸出物、1%产酶诱导物--黄芪水浸出物的培养基中,在温度28~30℃条件下搅拌通风培养50~100小时,离心除菌得上清液(含酶混合液),在上清液中用60~75%饱和度的硫酸铵沉淀酶蛋白、收集蛋白,溶于1/10发酵液体积的常用的醋酸缓冲液(0.02M,pH5.0)、或者磷酸缓冲液、Tris缓冲液中,透析除去硫酸铵,离心除渣,即为酶液;
b.用50毫升上述酶液、3克黄芪皂Chemicalbook苷和100毫升醋酸缓冲液(0.02M,pH5.0)混合均匀,在温度20~55℃条件下反应6~24小时,再加入1/3体积的正丁醇萃取皂甙三次,减压蒸干,得到黄芪皂苷粗品。用硅胶柱分离方法(文献3)得到0.5~0.8克的黄芪甲苷,黄芪甲苷的转化率达到60~90%,比从原3克黄芪皂苷中直接提取黄芪甲苷提高了6倍。上述酶液DEAE-Cellulose离子交换树脂柱方法和BioRed蛋白制备色谱仪分离提纯黄芪甲苷酶蛋白,用SDS电泳方法测定分子量,酶的分子量为5.0万。 |