HPLC法测定大黄碳酸氢钠片中的大黄素和大黄酚的含量

发布时间:2011-12-26 信息来源:admin 发布人:www.staherb.com 点击次数:2524

作者：曹锦红,潘渭樵,林黎　　

作者单位：1.浙江省湖州市第三人民医院湖州 313000 2.浙江省湖州市食品药品检验所

　　【摘要】[目的]建立高效液相色谱法测定大黄碳酸氢钠片中大黄素和大黄酚的含量。[方法] 采用高效液相色谱法;色谱柱为Shimpack clcODS(150×6.0mm，5.0um)，流动相为甲醇0.1%磷酸(85∶15)，流速为1.0ml/min，检测波长为254nm。[结果] 此方法线性关系良好.大黄素和大黄酚的平均回收率分别为98.5%、99.3%，RSD=1.3%、0.4%(n=9)。[结论]本法简便、准确，重现性良好，可用于大黄碳酸氢钠片的质量控制。

　　【关键词】高效液相色谱法,大黄碳酸氢钠片;大黄素;大黄酚上禾生物大黄素

　　Abstract：[Objective] TO establish an HPLC method for the determination of emodin and chrysophanol in rhubarb sodium bicarbonate tablets.[Methods] An HPLC method was applied; Chromatographic column was Shimpack clcODS(150×6.0mm，5.0um);The mobile phase was methanol0.1% phosphoric acid (85：15);Velocity of flow was 1.0ml/min;The detaction wavelength was 254nm.[Resulet] The linearty of this method was well.Emodin and chrysophanol average recovery rates were 98.5%，99.3%;RSD=2.75%，2.83%(n=9).[Conclusion] This method is simple,accurate with strong reproducibility，and can be used for the quality control of rhubarb sodium bicarbonate tablets.

　　Key words：HPLC; rhubarb sodium bicarbonate table; emodin; chrysophanol

　　大黄碳酸氢钠片是复方制剂，主要成份是由大黄、碳酸氢钠、薄荷油等组成，是助消化药及抗酸药类非处方药药品，主要用于食欲不振、胃酸过多[1]。大黄碳酸氢钠片的质量标准收载于卫生部药品标准化学药品及制剂第一册中[1]，并没有对大黄进行含量测定的内容，本文采用高效液相色谱法对其大黄素与大黄酚的含量进行测定。

　　1 仪器、样品及试药

　　Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent Technologies 1200 DAD检测器，Agilent chemststion工作站。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110756200110)，大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110796200513)，大黄碳酸氢钠样品(市售，上海黄海制药有限责任公司，批号：070610、070912、080417);甲醇为色谱纯，水为纯化水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Shimpack clcODS(150×6.0mm);流动相：甲醇0.1%磷酸(85∶15);检测波长：254nm;流速：1.0ml/min;柱温：25℃;进样量：10μl。

　　2.2 溶液的制备

　　取大黄素和大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含大黄素113.0μg和大黄酚121.7μg的溶液，作为对照品溶液。另取大黄碳酸氢钠片样品适量，研细，取约1片的量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10ml，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.3 专属性试验

　　分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入色谱仪，记录色谱图，大黄素和大黄酚两色谱峰分离良好，且其他各味药材及辅料对含量测定无干扰。

　　2.4 线性关系考察

　　分别精密吸取大黄酚(浓度为121.7μg/ml)和大黄素(浓度为113.0μg/ml)对照品溶液1ml、2ml、3ml、5ml、10ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以大黄酚峰面积积分值(A)为纵坐标，浓度(x)为横坐标绘制标准曲线。

　　2.5 精密度试验

　　精密吸取同一大黄酚(浓度为121.7μg/ml)和大黄素(浓度为113.0μg/ml)对照品溶液10μL，重复进样6次，记录峰面积，结果表明：大黄酚和大黄素峰面积积分值的相对标准偏差分别为1.23%和0.14%表明精密度良好。

　　2.6 重现性实验

　　取大黄碳酸氢钠片(批号070610)按[2.1供试品溶液的制备项]下制备6份样品，按照色谱条件注入高效液相色谱仪，测定大黄酚和大黄素的含量，结果见表3。结果表明：采用本方法测定大黄碳酸氢钠片中大黄酚和大黄素的含量，结果6份样品的峰面积积分值RSD分别为0.47%和1.32%，重现性良好。

　　2.7 稳定性试验

　　取同一供试品溶液(批号：070610)，按[2.1供试品溶液的制备]下制备样品，分别在0、2、4、8、12、24小时内测定大黄酚和大黄素的峰面积积分值。结果表明：RSD分别为0.11%和0.47%，表明大黄碳酸氢钠片样品在24小时内稳定。

　　2.8 加样回收率试验

　　取同一批号(070610)样品，研细，取约0.3 g，共5份，精密称定，分别加入含0.1217 mg/ml大黄酚0.5、1.0、1.5、2.0、3.0ml和含量0.1130mg/ml的大黄素0.2、0.5、1、1.5、2.0ml的对照品溶液，再按照“2.1”项下方法制得供试品溶液，进样，记录色谱图，计算回收率。结果测得，大黄酚平均回收率为97.70%，RSD为0.75%(n=5);大黄素平均回收率为98.12%，RSD为0.78%(n=5)。

　　2.9 样品含量测定

　　取批号(070610)的样品，按照[2.1供试品溶液的制备]项下方法分别制得供试品溶夜和对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定即得。见表7。表7 样品大黄酚、大黄素含量测定结果(略)

　　3 讨论

　　3.1 本品为片剂[1]。其中大黄主要含蒽醌类成分，游离性蒽醌不易溶解于水，结合性蒽醌和蒽醌苷类溶解于水[2]。本品中的大黄的主要提取成分是结合性蒽醌和蒽醌苷[3]，故供试品溶液先采用甲醇超声提取，溶解出蒽醌类成分，然后进行水解和氯仿萃取，试验结果表明，本法提取完全，简单易行。

　　3.2 本实验还对多种流动相条件[4]。结果发现以甲醇-0.1%磷酸(85：15)作为流动相，所得色谱图中大黄素与大黄酚分离较好，柱效较高，样品测定无干扰，是比较理想的色谱条件。

　　3.3 检测波长的选择，根据文献记载[5]，蒽醌类成分在254nm有最大吸收，故选择254nm作为检测波长。

　　采用HPLC法测定大黄碳酸氢钠片中大黄素和大黄酚的含量，方法简便、准确、重现性好，可以作为大黄碳酸氢钠片质量控制的方法.

　　【参考文献】

　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·化学药品及制剂[S].第一册.中华人民共和国卫生部药典委员会出版社，1989：8.

　　[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社，2005：17.

　　[3]匡海雪，董小萍.中药化学[M].中国中医药出版社，2002,81.

　　[4]华小东，王智华，王菊美，等.HPLC同时测定黄疸茵陈颗粒中大黄素、大黄酸、大黄酚的含量[J].中成药，2002,24(5)：340341.

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