【关键词】 HPLC法;绿原酸;清热祛湿冲剂,上禾生物，金银花绿原酸，金银花提取物

　　Determination of Clorogenic acid Contents in Heat-clearing andDewetting Medicinal Granules by HPLCWang GeHenan Pharmaceutical Technical School(Kaifeng)(475003)　Abstract：Objective：To establish HPLC means to detect the contents of Clorogenic acid in heat-clearing and dewetting medicinal granules.Methods：A C18柱column was used(5μm，4.6mm×250mm);The mobile phase：acetiontrile-0.4% aqueous solution of phosphoric acid(15：85);Velocity of flow：1.0 ml/min，wave length detected：327nm。Results：Linear range of clorogenic acid is 11.9μg/ml ～ 95.2μg/ml，r =1.0000.The average sample coefficient of recovery is 97.53%，RSD is 2.07%。Conclusion： This method is simple，rapid and accurate，which can be used as the quality controlling means of thismedicinal granules.

　　Key words：Means of HPLC;Clorogenic acid;heat-clearing and dewetting medicinal granules

　　清热祛湿冲剂由党参、茵陈、野菊花等7味中药材组成。功能清热祛湿、益气生津，用于暑湿病邪引起的四肢疲倦、食欲不振、身热口干。方中茵陈和野菊花都含有绿原酸，但标准中无含量测定方法，不利于制剂的质量控制。为更好的控制产品质量，保证产品的疗效，选用高效液相色谱法对方中绿原酸的含量测定进行了研究，建立了分离效果好，简便可行的含量测定方法，用于本制剂的质量控制。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器 高效液相色谱仪(DIONEX);电子分析天平(JA1003);紫外可见分光光度计(TU-1800)，超声波清洗器(KS-1500)。

　　1.2 试药 绿原酸对照品(中国药品生物检定所，批号：110753-200212);清热祛湿冲剂(自制批号：050115，050118，050121)，对比样品：广东众生药业股份有限公司;甲醇、乙睛为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件[1～2] 色谱柱;Diamonsil C18 柱(5μm，4.6mm×250mm);流动相：乙腈-0.4%磷酸水溶液(15：85);流速：1.0ml/min，检测波长为327nm;柱温：室温;进样量为20μl。

　　2.2 检测波长的选择 精密称取绿原酸对照品适量，加50%的甲醇溶解并稀释制成每1ml含5μg的溶液，照紫外分光光度法于200nm～700nm的波长范围内扫描，结果在327nm的波长处有最大吸收，故确定检测波长为327 nm。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，加50%的甲醇溶解并稀释制成每1ml含40μg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.3.2 样品溶液的制备 取供试品(批号：050115)约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加50%的甲醇适量超声溶解10min，放冷，加50%的甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.3.3 阴性样品溶液的制备 照处方比例制备野菊花、茵陈之外的空白样品，照2.3.2项下操作，制备阴性供试液。以上三种溶液按上述色谱条件进样，测定。结果绿原酸峰与其它组分峰分离度良好，阴性对照无干扰。

　　2.4 线性与范围 精密称取绿原酸对照品11.9mg，加50%的甲醇溶解并稀释至100ml，摇匀，作为贮备液;分别精密量取贮备液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml至10ml容量瓶中，加50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试液，在上述色谱条件下测定峰面积，并以进样浓度(C)为横坐标，峰面积积分值(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=763.41C-1369.4(r =1.0000)。结果表明绿原酸浓度在11.9μg/ml ～ 95.2μg/ml的范围内线性关系良好。

　　2.5 精密度试验 取上述试验中浓度47.6 μg/ml的供试溶液，在上述色谱条件下测定，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD为0.39%，n=6，这表明试验的精密度良好。

　　2.6 溶液稳定性试验 取重现性试验项下的样品(050115)溶液，按上述色谱条件分别于0h、1h、3h、5h、8h进样，记录峰面积，RSD为0.84%。试验结果表明，样品溶液在8h内进样是稳定的。

　　2.7 重现性试验 称取样品(批号：050115)约5g，各6份，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备，在上述色谱条件下测定绿原酸含量，平均含量为5.525mg/袋，RSD为0.32%。试验结果表明，样品含量测定方法的重现性良好。

　　2.8 加样回收试验 分别称取已知含量的样品(050115)6份，精密称定，和精密加入一定量的绿原酸，分别按2.3.2项下方法制备供试液，在上述色谱条件下测定绿原酸含量，结果平均回收率为97.53%，RSD为2.07%。

　　2.9 样品的含量测定 分别精密吸取对照品溶液与样品供试品溶液各20μl，按上述色谱条件进样，测定峰面积，并用外标法计算绿原酸含量，结果见表1。表1 含量测定结果试验结果表明，本品与已上市产品绿原酸含量无明显差异。

　　3 讨论

　　3.1 样品处理方法的选择 本品处方中野菊花、茵陈含量较大，我们参考文献[3]方法，以它们的共同有效成分绿原酸为指标，采用50%的甲醇为溶剂，控制产品质量。本试验比较了超声溶解10min、20min、30min绿原酸的提取率，结果测定结果表明超声处理10min、20min、30min，对其含量无明显影响，因此我们选择超声处理10min。

　　3.2 本试验方法的优点 本试验方法经过精密度、稳定性、重现性、加样回收等相关指标考察，表明该方法操作简便、准确、重现性好，可作为清热祛湿冲剂的含量测定方法。

   【参考文献】

　　[1]  姜丽霞.HPLC法测定野菊花中绿原酸的含量[J].中国药品标准，2003，4(6)：54-56.

　　[2] 刘影.茵陈药材中绿原酸的含量测定[J].西北药学杂志，2006，21(5)：207-209.

　　[3] 袁学勤.HPLC法测定野菊花中绿原酸的含量[J].中成药，2005，4(27)：493-494.

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