1. 薄层板制备
将吸附剂1份和0.2%羧甲基纤维素钠水溶液3份在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.25~0.5mm)取下涂好薄层的玻板,于室温下,置水平台上晾干,在反射光及透射光下检视,表面应均匀,平整,无麻点、无气泡、无破损及污染,于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用,或用商品预制板。
2. 点样
精密吸取供试品溶液 4μL、对照品溶液2μL与6μL,分别交叉点于同一以0.1%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上,如用点样器点样到薄层板上,一般为圆点,点样基线距底边1.0~1.5cm,样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
3. 展开
将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,以〔正丁醇-醋酸乙酯-水(4:1:5)的上层溶液〕-甲醇(10:1)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,展开,展距16cm以上,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在 100℃加热约 7分钟,至斑点显色清晰,取出。
4. 含量测定
在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板,周围用胶布固定,选择反射方式,采用吸收法,进行扫描,波长:λs=530nm, λR=700nm, 测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值,计算。
用外标法测定时,若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时,可用一点法校正,如不通过原点通常宜采用二点法校正,必要时用多点法校正。 |