一种雷公藤甲素的提取制备方法

发布时间:2022-02-06 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:439

雷公藤药材300公斤(经检测，其雷公藤甲素含量为0.0043％)，粉碎至20～30目，装入提取罐，加入3吨乙酸乙酯，再加入360g抗坏血酸，加热回流提取3次，每次5小时，提取液经过滤、减压浓缩得浸膏8.3公斤；用360升二氯甲烷溶解浸膏，打入萃取罐，另称取17.28 公斤NaOH，配制720升0.6moL/LNaOH溶液，分2次打入萃取罐，对二氯甲烷溶解液进行碱洗2次，浓缩二氯甲烷相得碱洗后浸膏2公斤；取10公斤200～300目青岛海洋柱层析正相硅胶，湿法裝直径35cm柱，碱洗后浸膏上样后先用二氯甲烷洗脱，待洗脱液颜色变淡后用二氯甲烷:甲醇＝50:1混合溶剂洗脱2个柱体积，然后用甲醇洗脱，浓缩甲醇洗脱液得甲醇洗脱物427g；取20公斤200～300目青岛海洋柱层析正相硅胶，湿法裝直径50cm柱，甲醇洗脱物上样后依次用石油醚:乙酸乙酯＝10:1、6:1、4:1、2:1、1:1(体积比)的混合溶剂进行梯度洗脱，每个比例洗脱约8个柱体积，收集含雷公藤甲素的洗脱液，浓缩至约1/8 体积后4℃下静置析晶，得雷公藤甲素粗品13.8g；将粗品用异丙醚作结晶溶剂在室温下进行重结晶，结晶完毕后过滤得雷公藤甲素纯品12.3g，HPLC检测其纯度为99.4％。

报道二、
1)超声强化提取：取雷公藤茎1.0kg，干燥粉碎后过60目筛，然后取100克粉末放入2500mL锥形瓶中，按固液比1：10(W/V)加入乙醇/水/1-乙基-3-甲基咪唑溴盐(4： 1：5，V/V/V)的混合物，于超声功率密度50W/cm2，超声频率50kHz，温度45℃条件下，超声提取20min，经固液分离得到含雷公藤甲素和雷公藤乙素的提取液。

2)有机溶剂萃取：将石油醚加入到上述步骤1)得到的提取液中，按提取液与石油醚的体积比5：1萃取3次，分离有机相得雷公藤甲素和雷公藤乙素萃取相，然后将得到的有机萃取相在50℃下减压浓缩至近干，得到含有雷公藤甲素和雷公藤乙素的黄色粗品。萃取余液循环使用，该萃取余液的主要成分为离子液体Ⅰ(1-乙基-3-甲基咪唑溴盐)。

3)HSCCC分离纯化：称取步骤2)得到的雷公藤甲素和雷公藤乙素的黄色粗品500 mg，选择甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-1-烯丙基-3-甲基咪唑溴盐(2：3：3：4∶0.05， V/V)作为HSCCC溶剂体系，将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤黄色粗品分别加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜，分相平衡后分出上相和下相。以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，调整转速为750r/min，柱温为30℃，用高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入 HSCCC螺旋管，根据检测器的谱图分步收集目标物，分别获得雷公藤甲素和雷公藤乙素的溶液。

4)真空冷冻干燥：将步骤3)得到的收集液，预冻温度-25℃，工作压力25Pa，升华温度50℃，解析温度65℃，得到纯度大于95％的雷公藤甲素和雷公藤乙素。

检测采用Agilent 1100series高效液相色谱仪，色谱柱为AccQ.Tag C18柱(150mm×3.9 mm i.d.,5μm，Waters,Milford,MA,USA)，流动相为0.05％(v/v)醋酸-醋酸铵溶液(5 mmol/L)/乙腈/甲醇(60：30：10，V/V/V)，流速为0.6mL/min，紫外检测器在220nm波长下进行检测，雷公藤甲素和雷公藤乙素的纯度均大于95％。

参考文献

[1] [中国发明,中国发明授权] CN201510213692.2 一种雷公藤甲素的提取制备方法

[2] [中国发明,中国发明授权] CN201510117363.8 一种利用离子液体高效提取雷公藤甲素和乙素的方法【公开】/一种利用离子液体提取雷公藤甲素和乙素的方法【授权】

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