心脑联通片是以细辛、灯盏、虎杖、野山楂、柿叶、刺五 加、葛根、丹参等为原药材制成的纯中药制剂，具有活血化 瘀、通络止痛的作用，用于瘀血闭阻引起的胸痹，眩晕，以及 冠心病心绞痛，脑动脉硬化及高血脂症见上述证候者。处方 中虎杖为主药之一，大黄素为其主要有效成分，参照原标准 以大黄素为含量测定的指标成分。该方法操作简便，结果准 确，并进行了系统的方法学考察。 

关键词：大黄素 心脑联通片 大黄提取物 大黄

 1 仪器与试药

 1．1 仪器

 惠普有限公司；Agilent高效液相色谱仪；N2000色 谱工作站；Hypersil C18(100 mmx4．6 mm，5 ILL)色谱柱。

 1．2 试药

 大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号： 110756—200211)，供含量测定用。心脑联通片(湖南星剑制药 有限公司生产，批号：20040202、20040208、20040214；规格： 0．45g／片)。实验用甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其它试 剂均为分析纯。

 2 方法与结果

 2．1 色谱条件

 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Hv— persil C，8(100 mmx4．6 mm，5 )色谱柱；甲醇一0．2％ 磷酸 溶液(75：25)为流动相；进样量：10 ixL；检测波长为438 nm；柱 温：40℃；流速：1 mL／min。理论塔板数按大黄素峰计算应不 低于3000。

 2．2 溶液制备

 2．2．1对照品溶液的制备

 精密称取以五氧化二磷为干燥剂 减压干燥12 h的大黄素对照品适量，加甲醇配制成每1 mL中 含52 g的溶液，即得。

 2．2．2 供试品溶液配制中提取时间的选择

 取本品20片，去薄 膜衣，精密称定，研细，取2琦各3份，精密称定，置具塞三角瓶 中，精密加入甲醇20 mL，密塞，称定重量，超声处理(3oo KHz， 50 W)20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，精密吸取续滤液10 mL，挥至近干，残渣)fl12．5 mol／L 硫酸溶液20 mL，分别加热回流0．5、1、2 h，稍冷，加三氯甲烷 25 mL，继续回流2 h，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲 烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取_一氯甲烷层，酸液再用三 氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并i氯甲烷液，蒸干，残渣加 三氯甲烷5 mL使溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度， 摇匀，用微孔滤膜(0．45 m)滤过，取续滤液10 ，注入液相 色谱仪，测定含量，结果表明回流提取1 h，含量已经提取完 全，因此选定提取1 h比较合适。(见表1 o

 2．2．3供试品溶液的制备

 精密称取本品约2 g，精密称定，置 具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，称定重量，超声处 理(3oo KHz，50 W)20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10 mL，挥至近干，残 渣加2．5 moYL硫酸溶液20 mL，加热回流1 h，稍冷，加三氯甲 烷25 mL，继续回流2 h，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯 甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用 三氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣 加三氯甲烷5 mL使溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，用微孑L滤膜(0．45 m)滤过，取续滤液，即得。

 2．2．4 阴性溶液的制备

 按处方配比称取除虎杖以外的其他 药材适量，按制备工艺制成缺虎杖的阴性样品，同法制备缺 虎杖的阴性样品溶液。

 2．3 专属性试验

 精密吸取对照品溶液5 tzL、供试品溶液和阴 性对照溶液各10 L，注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1_3)。 结果表明：供试品色谱图中，呈现与对照品相同保留时问的色谱 峰，而缺虎杖阴性溶液色谱中无此峰，说明阴性样品无干扰。

 2．4线性关系考察

 精密吸取浓度为52 p,g／mL的大黄素对照 品溶液2、4、6、8、10 p．L注入高效液相色谱仪，测定。以峰面积 积分值为纵坐标，以大黄素进样量( g)为横坐标绘制标准曲 线。其回归方程为：Y=lO05．99X一1415．5，r=O．9999，结果表明： 大黄素对照品在104—520ng范围内线性关系良好。

 2．5 精密度试验

 精密吸取同—供试品溶液，(批号：20040202) 10 ，按含量测定方法，连续测定6次，测定其峰面积积分 值，平均值为395028．77，RSD％为1．1％(n=6)，表明本方法精 密度较好。

 2．6 稳定性试验

 精密吸取同一供试品溶液(批号： 20040202)，25 oC室温放置，分别于0、4、8、12、16 h进样，每次10 L，记录色谱图，测定其峰面积积分值平均值为313690．86， RSD％为0．91％，表明供试品溶液在16 h内基本稳定。

 2．7 重复性试验

 取同一供试品(批号20040202)6份，照供 试品溶液的制备方法制成供试品溶液，进行含量测定，结果 平均含量为0．75 mg／g，RSD％=I．13％ (n=61，结果表明本方法 重复性较好。

 2．8 加样回收率试验

 取已测知大黄素含量的心脑联通片 (批号：20040202。含量为0．7536 mg／g)1．0 mg，精密称定，共取6 份，分别精密加入大黄素对照品溶液(浓度为0．77 mg／mL)1 mL，蒸干，精密加入甲醇20 mL，称定重量，超声处理20 min， 放冷，称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，按含量测定方法测定。按外标法以峰面积计算供试品中 大黄素的量，计算回收率。(见表2)。

 2．9 样品舍量测定

 分别取10批样品，照上述含量测定方法 分别测定并计算大黄素含量，参照原标准中含量限度及10批 样品的平均含量为0．41 mr,／片，按75％折算，规定本品含量测 定限度暂订为不得少于0．3 mg／片。(见表3)

 3 讨 论

 回流时间比较试验中，对回流时间进行了考察，在0．5—2 h进行对比，结果回流时间1 h测定值已经趋向最大。由于灵仙 跌打片成份复杂，故本品采用先用酸水解，再用i氯甲烷回 流提取的方法对样品进行处理，结果样品分离效果好，阴性无干扰。

 从以上方法学考察试验结果可知，本品大黄素的含量测 定方法简单方便，准确，灵敏度高，重复性好，能够准确测定 样品中大黄素的含量，可用于心脑联通片的质量控制。