抗感颗粒由金银花、赤芍等药材经适当加工制成。金银 花为君药，现行《中国药典》(2005版)抗感颗粒标准收载中 仅有金银花的主要药用成分绿原酸的鉴别方法．尚未收载其 含量测定方法，不利于该制剂的质量控制。对抗感颗粒中绿 原酸含量测定通过设计正交实验的超声提取研究未见报 道『l-4]。本研究通过正交实验对抗感颗粒中绿原酸的超声提取 条件进行优化，建立高效液相色谱法准确、快速测定抗感颗 粒中绿原酸含量的方法，为抗感颗粒质量控制的完善提供可 靠依据。

关键词：金银花绿原酸  金银花提取物  金银花  绿原酸

 1实验材料

 1．1仪器与试剂

 Agilent 1200型HPLC仪，四元梯度泵，柱温箱，VWD可 变波长检测器(Agilent Technologies)；7725i手动进样器配2O l定量杯；Human PowerIII超纯水机；KQ118型超声波清 洗器(昆山市超声仪器有限公司)；AD一2Z Autobalanee (Perkin—Klmer)

 绿原酸对照品(批号110753—200413)购于中国药品生 物制品检定所；甲醇为HPLC级试剂：实验用水为超纯水；冰 醋酸为分析纯。抗感颗粒(规格l0 袋，批号070310、070618、 070712)购于长春市某大药房。

 1．2色谱条件

 Agilent 1200型高效液相色谱仪：Liehrospher—XDB—C18 柱(4．6mmx250mm，5 I．zm，Agilent)；柱温2 ；检测波长326 nm； 流动相：甲醇：2％冰醋酸水溶液(20：80)；流速1．0 mYmin。

 1．3供试品制备

 精密称取本品0．25 g置于小烧杯中．用适量甲醇水溶液 溶解，定量转移至50 ml容量瓶中，超声，0．45 m微孔滤膜 过滤，取续滤液。

 2方法与结果

 2．1系统适用性实验

 图1中绿原酸与距离最近组分的分离度为4．2，理论塔 板数按绿原酸计为nef=9 264．5。本试验色谱条件下被测组 分与样品中其他组分能很好地分离。

 2．2标准曲线

 配置浓度为1l0．0、55．0、22．5、11．2、5．6 I,ZgJ ml的绿原酸 对照品，并分别吸取22．5 g／ml绿原酸对照品溶液100 Ixl， 以20 l定量杯定量。按最佳色谱条件测定，记录色谱峰面 积，标准曲线为： =54．1C一52．2(R2=9 993，n-6)，结果表明在 5．6～110．0 Ixg／ml浓度范围内．绿原酸含量与峰面积具有良好 的线性关系。

 2．3精密度实验

 取绿原酸浓度为22．5 Ixg／ml的对照品溶液．重复进样 6次，记录色谱峰面积，计算得RSD为2．07％ ，说明仪器具有 较好的精密度。

 2．4绿原酸提取工艺优选

 2-4．1实验因素与水平以甲醇水溶液作为溶剂。以抗感颗粒 装量项下绿原酸提取量为考核指标，优选提取绿原酸的工艺 条件，包括甲醇浓度、提取时间、提取温度，采用 (341正交表 进行实验，因素水平见表1。

 2．4．2提取工艺优选精密称取抗感颗粒0．25 g于50 ml容 量瓶中稀释至刻度并精确称重。按表2中确定的条件进行超 声，冷却后用甲醇补足失重．HPLC测定．实验结果见表2。

 分析结果表明，影响抗感颗粒中绿原酸提取的因素为： 温度>提取时间>溶剂浓度。绿原酸是奎宁酸和咖啡酸的酯。 对热不稳定[51。故最佳提取温度为60℃。提取时间短，绿原酸 不能完全溶出；提取时间延长．在超声波的长时间作用下可 能发生解离16]，最佳提取时间为15 min。溶剂浓度对提取率影 响不大。抗感颗粒中绿原酸提取的最佳条件为20％甲醇、 60℃ 、提取15 rain

 2．5稳定性实验

 精密吸取同一供试品溶液，按最佳色谱条件分别在0、 4、8、12、24 h取供试品溶液注入液相色谱仪测定。样品溶液 的稳定性实验表明，室温下8 h内测定峰面积基本一致。

 2．6回收率实验

 取已知含量的供试品，分别精密加入绿原酸对照品适 量，按实验所得最佳条件进行测定，绿原酸平均回收率为 98．9％，RSD为2．38％。

 2．7专属性实验

 按处方比例，制备不含金银花提取物的阴性样品，按样 品测定方法进样分析。采用HPLC测定绿原酸时．其他成分 对测定无干扰。

 2．8样品含量测定

 取三种不同批号的样品按最佳实验条件超声提取、测 定。实验结果如表3，表明此方法能够快速、准确、稳定地反 映抗感颗粒中绿原酸的真实含量。

 3讨论

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