复方杜仲口服液是以杜仲叶、桑叶为主要原料经提取制成的中药保健产品。研究资料表明：杜仲叶和桑叶提取物分别具有多种保健功能，杜仲叶具有降压、抗衰老、抗动脉粥样硬化等作用¨ ；桑叶提取物桑叶黄酮具有降血糖的作用等等。本文对复方杜仲口服液对免疫功能的影响进行实验研究，现将结果报告如下。

1 材料和方法

1．1 药品复方杜仲口服液：为棕褐色液体，人体推荐量为每人每日500ml成品，由三原华州医药生物工程生产基地生产，批号：2008103。由于人体摄入量较大，故该实验将受试物减压浓缩(65℃)成浓缩液(1：9)，本研究采用浓缩液进行实验并按浓缩液进行剂量设计。

1．2 实验动物清洁级昆明种小鼠200只，雌性，体重18～ 22g，由第四军医大学实验动物中心提供，生产许可证号： SCXK(军)2007—007号。动物室温度22～24℃ ，湿度45％～ 55％ 。动物房使用许可证号：SYXK(陕)2007—004号。 1．3 仪器与试剂 高压灭菌器、超净工作台、CO 恒温培养箱、恒温水浴箱、752N紫外可见分光光度计、BIO—RAD酶标仪、离心机、24孔培养板、96孔培养板、游标卡尺。绵羊红细胞(SRBC)、鸡红细胞、YAC一1细胞、印度墨汁、MTr液、 ConA、RPblI1640培养液、乳酸锂、硝基化氯氮唑(iTw)、吩嗪二甲酯硫酸盐、"Iris—HC1等。

1．4 分组及给药将200只雌性小鼠分为5组进行实验，每组40只并随机分为4组，空白组及复方杜仲口服液 18．52ml／kg、9．26ml／kg和4．63ml／kg(分别相当于人体推荐成品用量的2O、1O和5倍)组，空白组予蒸馏水。每组10 只。每天灌胃1次。

1．5 统计学处理采用方差分析。

1．6 小鼠迟发型变态反应(DTH)测定于灌胃第26天，给小鼠腹腔注射2％ 绵羊红细胞(SRBC)0．2ml／只进行致敏，于免疫后第4天小鼠左后足跖部皮下注射20％SRBC(20 ／只)进行攻击。并于攻击前和攻击后24小时测量小鼠左后足跖同一部位厚度，计算攻击前、后的差值。

1．7 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验MTr法。对各组小鼠无菌取脾，制备脾细胞悬液，用RPMI1640完全培养液调整脾细胞浓度为3×10 A／mt，按照程序中MTr法进行淋巴细胞增殖反应，最后在752N紫外可见分光光度计 570nm波长处测其光密度值(OD)，计算ConA 与ConA一各孔的光密度差值。

1．8 NK细胞活性测定实验前24小时将YAC一1细胞 (靶细胞)传代培养，以Hank’S液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4 x 10 ~-／ml(活细胞>95％)。对各组小鼠无菌取脾，制脾细胞悬液(效应细胞)，用RPMI1640 完全培养液调整脾细胞浓度为2×10 个／L(活细胞 >95％)。取靶细胞和脾细胞悬液各100- 加入96孔u型培养板中(效靶比50：1)，并设靶细胞自然释放孔和最大释放孔，各项均作3个平行孔。5％CO 培养箱中37℃培养4 小时、离心(1500r／min)5分钟。每孔吸取上清100I 置96 孔平底培养板中，同时加入LDH基质液100 ，反应7分钟后每孔加入1 mol／L的HE130 ，用酶标仪在490nm处测定光密度值(OD)，计算NK细胞活性转换值。

1．9 血清溶血素测定于灌胃第26天给小鼠腹腔注射2％ SRBC(0．2ml／只)，于免疫后第4天摘眼球采血，分离血清并在微量血凝板上进行血清溶血素测定，37℃孵育3小时后，统计血球凝集度，计算相应抗体积数。

1．10 抗体生成细胞(PFC)检测 于灌胃第26天给小鼠腹腔注射2％SRBC(0．2ml／只)，于免疫后第4天处死，解剖取脾制备脾细胞悬液，用RPMI1640完全培养液调整脾细胞浓度为5 x 10 个／fnl。按程序方法制备琼脂糖玻片，在二氧化碳培养箱(37℃ 、5％CO )中温育1．5小时后加补体，再温育 1．5小时，计数每张琼脂薄层玻片上形成的溶血空斑数并计算成l0 个脾细胞周围的溶血空斑数。

1．11 碳廓清实验按顺序给各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(4倍稀释)0．1ml／10g。每鼠均于注射墨汁后2分钟及1O 分钟分别准时内眦采血20 ，并迅速加入到2ml 0．1％ 碳酸钠溶液中并摇匀，以752N紫外可见分光光度计600nm波长处测光密度值(OD)。同时取小鼠肝、脾称重，按公式计算吞噬指数(a)。

1．12 鸡红细胞吞噬试验于末次给药后各组小鼠均腹腔注射20％鸡红细胞悬液(1ml／只)，间隔3O分钟处死小鼠，腹腔注人生理盐水2ml／只，转动鼠板1分钟后吸取腹腔洗液制片，37~C温育3O分钟，漂洗、晾干、固定后染色镜检。计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和巨噬细胞吞噬鸡红细胞数，计算吞噬率转换值和吞噬指数。

1．13 统计方法实验数据用 ±s表示，采用方差分析方法进行统计处理。

2 结果

2．1 对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响结果见表1。

2．2 对小鼠脾淋巴细胞转化功能及NK细胞活性的影响结果见表2。

3 讨论

本实验结果表明：复方杜仲口服液可抑制小鼠迟发型变态反应，增强淋巴细胞转化功能及NK细胞活性，提高血清溶血素水平，促进抗体细胞形成，说明其具有增强免疫功能作用。

杜仲提取物   绿原酸  金银花提取物  苦杏仁苷  枇杷叶提取物-熊果酸    大花紫薇提取物-科罗索酸

  淫羊藿苷  二氢杨梅素  獐牙菜苦苷  杨梅素  10-羟基喜树碱  7-乙基-10羟基喜树碱

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