正交设计研究金银花绿原酸煎提工艺 |
发布时间:2011-01-10 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:3134 |
摘要:目的:优选金银花绿原酸煎煮提取的最佳工艺。方法:利用正交试验法.以总浸膏得率和绿原酸含量为指标,考察粉碎度、提取时间、提取次数和加水量对煎煮工艺的影响。结果:最佳工艺为金银花粉末过50目筛,加水量30倍,煎煮3次,每次煎煮30 min。 关键词:金银花;绿原酸;正交设计;提取工艺 金银花原名忍冬,是忍冬科忍冬属植物忍冬L.japoniea Thunb.及同属多种植物的干燥花蕾,金银花具有抗菌和增强机体免疫功能的作用,味甘、性寒、清热解毒、凉散风热,其医疗作用十分广泛。现代研究表明:绿原酸和异绿原酸作为金银花的主要成分有多种药理活性,具有显著的清热解毒、抗菌消炎和延缓衰老作用,对消化道的癌症有明显的抑制作用,还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[1]。因此绿原酸含量的高低是目前衡量金银花品质优劣的主要指标。 目前从金银花中提取绿原酸多采用煎煮法、浸溃法、回流法等 [2,3],其中最常见易行的方法是煎煮提取法,但由于提取条件没有优化,绿原酸得率较低,金银花得不到充分利用,导致资源浪费。为了保证金银花有效成分的提取完全,笔者通过正交设计实验,以绿原酸含量为考察指标,结合总浸膏得率优选最佳工艺,对影响有效成分提取的条件和因素进行了探讨,为金银花的煎煮提取工艺提供科学依据。 1 仪器与材料 金银花药材由安徽医科大学药学院鉴定、提供;绿原酸标准品由中国药品生物制品检定所提供,其他化学试剂均为分析纯。722S型紫外可见分光光度计,上海精密科学仪器有限公司产品;JT12001电子天平,上海精天电子仪器厂产品。 2 实验设计 根据文献报道及中药材的传统提取经验,确定考察因素为金银花粉末的粉碎度、加水量、加热提取时间、煎煮次数,分别取3个水平进行考察。考察因素及水平见表1。采用L9(3 )正交实验表设计实验方案,以总浸膏得率和绿原酸含量作为质控标准。 3 方法与结果 3.1 金银花的预处理将干燥的金银花粉碎后,分别通过10,30,50目筛,按每包10 g分装后置干燥器内备用。 3.2 总浸膏得率的测定 按正交设计表规定的实验条件,每次取定量的金银花药材进行实验,将实验所得的煎煮液先置于蒸发皿中,水浴蒸至近干,将其连同蒸发皿一起转移到真空干燥箱中,低温下用油泵减压干燥至恒重,准确称质量。总浸膏得率=(浸膏质量/药材量)×100%,记录每次实验所得的总浸膏得率,实验结果见表2。 3.3 绿原酸含量测定[4,5] 3.3.1 标准曲线的绘制:精密称取经五氧化二磷减压干燥过的绿原酸对照品2.0 mg,用0.2 mo1./L盐酸溶解并定容于100 ml容量瓶中,配制成20.0 Iug/ml的对照品溶液。精密吸取1.O,2.O,4.0,6.0,8.0,10.0 m1分别置于10 ml容量瓶中,0.2 mol/L盐酸定容,配制成浓度分别为2.0,4.0,8.0,12.0,16.0,20.0 ug/ml的溶液,以0.2 mol/L盐酸作空白对照,324 nm处测定吸收度,用最/b--乘法经线性回归,得回归方程:c=22.486 5A一0.294 2,r=0.999 0,金银花绿原酸的含量在2.78—20.94 ml范围内线性关系良好。 3.3.2 样品绿原酸含量测定:精密称取总浸膏100mg,加无水乙醇溶解,过滤除去不溶性杂质,挥干乙醇后同样用0.2 mol/L的盐酸溶解,并定容至50ml,精密吸取5.0 ml,再加0.2 mol/L盐酸定容至50ml。按上述方法测定其吸光度,带入回归方程计算绿原酸浓度c( ug/m1),绿原酸含量为0.5 c%,记录每次实验所得浸膏中的绿原酸含量。结果见表2。 3.4 方差分析上述试验所用正交表除各因子列外,无空白列作对照,所以采用常规方法,将离差平方和中最小的项来近似作为误差的估计,用来计算各因子列的F比值 [6],采用SPSS 11.5统计软件包进行数据统计,实验结果见表3。 以总浸膏得率为考察指标,由表3方差分析结果结合表2极差R值进行分析,各指标因素的主次顺序D>A>B>c,最优方案为D3A1B3c2,以金银花得率为考察指标,各指标因素的主次顺序仍为D>A>B>c,最优方案为D3A3B3C1,综合两个考察指标工艺条件,金银花煎煮的最佳工艺为A1B3C1 D3。 3.5 验证实验 按最佳工艺条件A1B3C1D3进行验证实验,两次实验平均结果为金银花总浸膏得率为60.74%,绿原酸含量为6.78%,实验结果较为理想,说明该工艺条件简单、稳定、可行。 4 结论 按方差分析的观点,只需对有显著意义的因素确定好的水平,对其他因素则可以按实际需要来确定适当的水平。对于总浸膏得率指标来说,煎煮次数(因素D)、粉碎度(因素A)与煮沸时间(因素c)相比有显著性差异,虽然对于绿原酸含量指标来说A 相对较好,但因素A与因素c相比无显著性差异,因此综合考虑D 3A1。为最佳条件。从极差分析结果得出的结论可以看出,B3的得率最高,另外c因素的3个水平对结果的影响不大,再考虑绿原酸在提取过程中会发生化学变化,提取时间不易过长,笔者认为提取30 min可以达到较好提取效果。综合上述各种因素,金银花煎煮的最佳工艺为A1B3C1D3,即金银花粉末过5O目筛,加水量为3倍,每次煎煮30 min,共煎煮3次,该工艺条件可供工业化生产参考。 参考殳献: [1]石钺,石任兵,陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成份及药理研究进展[J].中国药学杂志,1999,34(11):724— 727. [2]林缎嫦,宋劲诗,吴应雄.金银花中绿原酸提取工艺探讨[J].中成药,1994。16(7):2—3. [3]李志华,徐让翻.不同提取工艺对金银花绿原酸提取率的影响[J].中草药,2002,33(8):714—715. [4]阚毓铭.中药制剂分析[M].南京:南京大学出版社,1992.405. [5]何报作.紫外光度法测定金银花中绿原酿含量的改进[J].广西中医药.1992。15(5):45. [6]于立芬.数理统计方法[M].上海:上海科学技术出版社,1985.173 产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |