高效液相色谱法测定杜仲皮中绿原酸的含量 |
发布时间:2011-01-05 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2499 |
石少澜2 , 王祝举1 , 邵爱娟1 ,黄璐琦1 (1 中国中医研究院中药研究所, 北京100700 ; 21 河北农业大学, 河北保定071001) 杜仲为杜仲科杜仲属植物Eucommia ulmoides Oliv1 ,是我国特有的经济树种,国家二级保护植物。传统以皮入药,味甘、性温,归肝、肾经,具有补肝肾、强筋骨、安胎的功效[1 ] ,是一种名贵滋补药材,也是我国传统的出口创汇商品之一。杜仲皮含有木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、多糖等多种活性成分[2 ] 。绿原酸属苯丙素类化合物,具有抗菌消炎作用[3 ] ,是杜仲皮中主要有效成分之一。为了考察其与产地、年龄、树皮变异类型(光皮型、浅裂型、深裂型) 之间的关系,本研究建立了反相高效液相色谱法,对不同产地、不同树龄、不同变异类型、炮制与非炮制等杜仲皮中的绿原酸含量进行分析,为药材的质量评价提供了依据。 1 仪器与试剂 Waters Alliance 高效液相色谱仪(Waters 600 con2 troller ,Waters 2487 单波长紫外检测器,Millennium32色谱工作站) ; BIS210S 型1/ 1 万电子分析天平(德国sartorius 公司) ;CX2250 超声波清洗器(北京医疗设备二厂) 。甲醇、乙腈为一级色谱醇;醋酸为优级纯;绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所,批号为532200111 ;实验药材分别购自四川成都、湖北郧西黑山林场、湖北巴东三峡林场、湖南慈利江垭林场、陕西略阳金家河林场等,经中国中医研究院中药研究所黄璐琦研究员鉴定为杜仲科植物杜仲E1 ulmoides 的树皮。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Kromasil2C18色谱柱(416 mm ×250mm ,510μm) ;流动相甲醇2乙腈2冰醋酸2水(4∶3∶2∶91) ;检测波长325 nm;流速110 mL·min - 1 。柱温25℃。在该色谱条件下,样品中绿原酸峰与其他非被测成分峰能够达到基线分离,对照品与样品的色谱图见图1。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品1.25 mg ,置于10 mL 量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,即得0.125 mg·mL - 1的贮备液,准确吸取2.5mL 的贮备液置另一10 mL 量瓶中,再用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含绿原酸010312 mg·mL - 1的对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取干燥的杜仲树皮,用碾碎机碾成絮状,混合均匀。精密称定1 g ,置100 mL锥形瓶中,准确加入50 %甲醇50 mL ,称重后超声提取60 min ,取出,放至室温后再称重,补足挥发的溶剂重量,摇匀,过滤,取续滤液25 mL ,50 ℃以下减压蒸干,用甲醇溶解,定容到5 mL 量瓶中,用微孔滤膜过滤即为供试品溶液。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取01031 2 mg·mL - 1的对照品溶液1 ,3 ,5 ,7 ,9 ,11 ,13 ,15μL ,在所选择的色谱条件下进样分析。以进样量(μg) 为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为Y= 21788 6 ×106 X + 19 039 , r = 01999 8。结果绿原酸在0.031 2~0.468 8μg 线性关系良好。 2.5 稳定性试验 对同一供试品溶液分别于制备后0 ,2 ,8 ,24 ,48 h 测定绿原酸峰面积。结果RSD1.2 % ,表明样品在48 h 内具有良好的稳定性。 2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL ,连续进样5 次,测定峰面积值,RSD 0.16 %。 2.7 重复性实验 准确称取同一样品共5 份,每份1 g ,照“供试品溶液制备”项下操作,测定,测得其平均含量为0.013 % ,RSD 1.1 % ,表明方法重复性良好。 2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品5 份,每份1 g ,加对照品适量,按“供试品溶液制备”项下操作,测定,计算回收率,结果见表1。 2.9 样品含量测定 根据上述条件对14 份样品进行含量测定。结果见表2。绿原酸的含量随树皮类型的不同有较大差异。其中光皮型含量最高,浅裂型次之,深裂型最低。光皮型与深裂型能相差几十倍。而与树龄、地域关系不大。炮制后的杜仲皮仍含有绿原酸。枝皮中的绿原酸含量很低。 3 讨论 3.1 实验采用HPLC 测定杜仲树皮中绿原酸的含量,结果准确,精密度,重复性好,平均加样回收率为97.4 % ,RSD 3.0 %。 3.2 对流动相进行了比较,曾用了不同比例的甲醇-水,甲醇-醋酸-水,甲醇-异丙醇-醋酸-水,乙腈-醋酸-水,甲醇-乙腈-醋酸-水等系统,结果以甲醇-乙腈-冰醋酸-水(4∶3∶2∶91) 条件较好,保留时间适中,绿原酸能与非被测成分基线分离。 3.3 对提取方法进行考察时,比较了甲醇的含量及提取时间。以水、20 %甲醇、50 %甲醇、80 %甲醇、甲醇为溶剂,超声提取60 min ,结果以50 %甲醇为溶剂时,色谱峰分离效果最佳,而且提取完全; 比较15 ,30 ,45 ,60 ,90 min 的超声提取效果,结果60 min可提取完全。 [参考文献] [1 ] 中国药典1 一部1 20001 1311 [2 ] 国家中医药管理局中华本草编委会1 中华本草1 上册1 上海:上海科学技术出版社, 19961 2861 [3 ] 杜红岩1 杜仲活性成分与药理研究的新进展1 经济林研究,2003 , 21 (2) :581 [4 ] 王嗣岑,贺浪冲,高锦明,等1 RP2HPLC 法同时分离测定杜仲叶中3 种有效成分1 西北药学杂志, 2001 , 16 (1) :151 [5 ] 董娟娥, 马柏林, 刘 丽, 等1 超声波提取杜仲叶中有效成分工艺研究1 西北林学院学报, 2003 , 18 (3) :661 [6 ] 张康健, 王 蓝, 张凤云, 等1 杜仲叶与皮有效成分含量的比较研究1 西北林学院学报, 1996 , 11 (2) :421 [7 ] 熊佐章1 HPLC 法测定银翘解毒颗粒中绿原酸的含量1 中国药师, 2003 ,6 (10) :6361 产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |