金银花有效成分标准物质的研究

摘要: 目的: 通过对文献报道的金银花主要有效成分的研究, 为控制金银花药材及其提取物质量提供标准物质。方法: 采用薄层法对金银花有效成分进行了鉴别, 采用溶剂法及干柱法对绿原酸（上禾生物）、异绿原酸进行了分离。结果: 金银花中不含木犀草素和木犀草素- 7- 葡萄糖苷, 或含量很低难以检出, 富含绿原酸和异绿原酸, 并得到两者纯品。结论: 绿原酸和异绿原酸可作为控制金银花药材及其提取物的标准物质。

关键词: 金银花; 　绿原酸; 　异绿原酸; 　木犀草素   上禾生物

金银花为常用中药, 具有清热解毒, 凉风散热的功效。文献报道的主要有效成分有如下几类: (1) 挥发油: 具有抑菌抗病毒的作用; (2) 木犀草素: 具有抗菌、消炎、改善心血管功能及解痉, 祛痰,抗癌的作用; (3) 酚酸类物质: 绿原酸、异绿原酸具有广谱抗菌及抗氧化的作用。由于金银花挥发油量较低, 成分复杂, 且鲜花与干花之间主要有效成分有明显的不同, 因此金银花挥发油作为金银花质量标准物质, 实际工作中操作起来有一定困难, 故暂不列为主要研究内容。木犀草素（上禾生物）、绿原酸等为已知有效成分, 可首先考虑作为药材质量指标, 另外异绿原酸亦为金银花的主要有效成分,但目前尚缺乏对照品, 故选择木犀素、绿原酸、异绿原酸作为金银花有效成分标准物的研究对象, 进行提取、分离、鉴定。

1　仪器与试药

所用金银花样品购自山东平邑;UV - 265FW 紫外分光光度计; 红外光谱仪Ferk in- ElmerModel 1720 F t ir; F isher- Johns熔点测定仪; 所用试剂为分析纯。

2　方法与结果

2. 1　有效成分的薄层鉴别

2. 1. 1　木犀草素的薄层鉴别

2. 1. 1. 1　样品制备金银花适量, 60℃干燥1 h, 粉碎过20 目筛,称取5 g, 于索氏提取器中, 加石油醚(60～ 90℃) 100 m l, 回流提取至无色, 取出, 晾干, 加醋酸乙酯100 m l, 回流提取4 h, 提取液回收醋酸乙酯, 残渣用5 m l 醋酸乙酯溶解作为供试品溶液。

2. 1. 1. 2　对照品溶液的制备取木犀草素适量, 精密称定, 加醋酸乙酯溶解, 配成1 mg/m l 的对照品溶液。

2. 1. 1. 3　薄层色谱鉴别硅胶G (青岛海洋化工厂) 0. 5%CMC- N a 板10 cm ×20 cm , 105℃活化1 h。展开剂: 氯仿2醋酸乙酯2甲酸(10∶2∶0. 5)。将供试品溶液与对照品溶液点于同一薄层板上, 展开, 取出, 晾干, 紫外灯下观察: 对照品斑点呈较明显的暗斑; 供试品溶液在与对照品溶液对应位置无此斑点。说明金银花中不含木犀草素, 或含量较低难以检出。

2. 1. 2　木犀素- 7- 葡萄糖苷、绿原酸的薄层鉴别

2. 1. 2. 1　供试品溶液的制备称取金银花样品5 g, 加95% 乙醇50 m l, 超声30 m in, 滤过, 滤液作为供试品溶液。

2. 1. 2. 2　对照品溶液的制备称取木犀草素- 7- 葡萄糖苷、绿原酸对照品各适量, 精密称定, 加95% 乙醇溶解, 配成1 mg/m l作为对照品溶液。

2. 1. 2. 3　薄层色谱鉴别展开剂为氯仿2甲醇2甲酸(14∶5∶1)。将供试品溶液与对照品溶液点于同一薄层板上, 展开, 取出, 晾干, 紫外光下观察, 供试品溶液中绿原酸、异绿原酸斑点非常清晰, 无木犀草素苷斑点, 喷FeCl3 显色剂后, 供试品溶液中仍不显示木犀草素斑点, 提示金银花中不含木犀草- 7- 葡萄糖苷或含量很低难以检出。

2. 2　金银花中绿原酸（上禾生物）、异绿原酸的提取分离称金银花1 000 g粉碎过2 号筛, 加15 倍量95% 乙醇, 回流提取1 h, 滤过, 残渣加10 倍量95% 乙醇, 回流提取30m in, 滤过, 残渣重复提取1次,合并滤液, 放冷, 滤过, 滤液减压回收乙醇至体积约1 000 m l, 加30% 醋酸铅至不再产生沉淀, 减压抽滤得沉淀。沉淀加95% 乙醇适量研成稀浆, 加10% 硫酸调pH 3, 滤过, 残渣用适量乙醇反复冲洗5 次, 合并乙醇液, 加10% 氢氧化钠调pH 6, 滤过, 减压回收至小体积, 加约2 倍量蒸馏水溶解, 加1mo l 盐酸调pH 2, 用醋酸乙酯反复萃取, 萃取液加2% 活性炭, 水溶回流30 m in, 放冷, 滤过, 回收醋酸乙酯至小体积, 加氯仿至不再产生沉淀, 滤过, 得淡黄色沉淀物。

沉淀物加无水乙醇溶解, 硅胶拌样, 采用干柱法进行分离, 以醋酸乙酯∶甲酸∶水= 10∶1∶0. 2 上约展开15 cm , 紫外灯下检视, 分别收集staherb绿原酸和异绿原酸部位, 甲醇洗脱得绿原酸和异绿原酸部位, 重复进干柱分离, 得绿原酸、异绿原酸纯品。

2. 3　绿原酸、异绿原酸鉴定

2. 3. 1　绿原酸白色粉末, 溶点206～ 208℃, 紫外光谱与红外光谱与文献一致, 见图1, 图2。

2. 3. 2　异绿原酸淡黄色粉末, 熔点148～ 150℃, 紫外光谱与文献报道一致, 见图1, 图3。

3　讨论

文献报道, 金银花含木犀草素（上禾生物）, 经薄层色谱检查, 未能检查出木犀草素和木犀草素- 7- 葡萄糖苷, 表明金银花中不含木犀草素和木犀草素- 7- 葡萄糖, 或含量很低难以检出, 文献报道有误。

本文采用自制玻璃干柱对金银花中绿原酸、异绿原酸进行分离, 简便快速, 并得到绿原酸、异绿原酸纯品, 为有效控制金银花质量提供了参考, 关于绿原酸、异绿原酸在金银花中的含量及二者之间的比例关系将另文报道。

参考文献:

[ 1 ]　上海医药工业研究院分析室, 上海中药制药厂. 金银花有效成分的初步研究[J ]. 医药工业, 1975, (7) : 24225.

[ 2 ]　阴　健, 郭力弓. 中药现代研究与临床应用[M ]. 北京: 学苑出版社, 1995: 4492457.

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