杜仲提取物的致突变实验研究

发布时间:2021-03-20 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:1100

目的研究杜仲提取物的致突变性，为其应用提供理论依据。方法对实验小鼠灌服不同剂量的杜仲提取物水溶液，检测小鼠骨髓微核率、精子畸形率及采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验(Ames实验)进行观察。结果杜仲提取物水溶液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率无影响；对小鼠精子无畸形诱变作用；对供试菌株无致突变作用。结论杜仲提取物对受试物未见有明显的致突变作用。

【关键词】杜仲微核致突变实验
杜仲Eucommia ulmoides Oliv在我国的应用历史悠久，近几年我国学者在杜仲的生物学、化学成分、生理生化等方面做了许多研究，董娟娥等［1］报道了杜仲籽油具有降压、降血脂及抗肿瘤等作用。唐建军等［2］报道：杜仲含有丰富的维生素E和β-胡萝卜素，有延缓衰老、增强机体免疫力作用。为更好地开发利用杜仲，我们在探索张家界产杜仲提取物（简称杜仲提取物）的亚慢性毒理学作用［3］的基础上，对其致突变作用进行了研究，旨在为其应用提供一定的理论依据。
1 材料
1.1 药品与动物杜仲提取物主要成分绿原酸，张家界恒兴生物科技公司提供。昆明种小鼠购于湖南中医学院实验动物中心，批号：990218 。注射用环磷酰胺：上海华联制药有限公司，批号：030504。叠氮钠（NaN3）：上海试剂一厂，批号：990706。鼠伤寒沙门氏菌株（TA97，TA98，TA100，TA102）购于中国农科院兽医药品监察所。
1.2 主要仪器ES-C300A电子天平：湘仪天平仪器厂。组织匀浆器：北京玻璃仪器厂。
2 方法与结果
2.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核试验小鼠60只，体重（28±2）g，雌雄各半，随机分为6组。杜仲提取物稀释液设为1.28，0.64，0.32，0.16 g/kg 4个剂量组，阴性对照为蒸馏水，两次灌胃给予受试物。阳性对照为环磷酰胺（CP）40 mg/kg体重，两次腹腔注射间隔24 h，第2次给受试物后6 h，颈椎脱臼处死动物。按国家标准［4］取骨髓制片，每只动物计数1 000个嗜多染红细胞，微核率以百分率表示。结果见表1。
表1 杜仲提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率实验（略）
与阴性对照组比较，**P＜0.01，△P＞0.05；n=10

由表1可知，实验组雌、雄小鼠微核发生率为0.39%～0.43%，阴性对照组为0.43%，阳性对照组为4.38%，实验组与阴性对照组比较，微核发生率均无差异显著性（P>0.05），阳性对照组与阴性对照组比较，差异性显著（P<0.01）。
2.2 杜仲提取物对小鼠精子畸形的试验雄性小鼠60只，体重（30～35）g，随机分为6组，实验组剂量为1.28，0.64，0.32，0.16 g/kg体重与阴性对照组（生理盐水），经口腔给予。阳性对照组用环磷酰胺40 mg/kg体重腹腔注射。各组1次/d，连续5 d给予受试物。于首次给药后第35天，颈椎脱臼处死小鼠，按纪云晶［5］方法制片。每组计数2 000个精子，计算其畸形率。结果见表2。
表2 杜仲提取物对小鼠精子畸形的影响（略）
与阴性对照组比较，**P＜0.01，△P＞0.05；n=10

由表2可知，实验组小鼠的精子畸形率为7.6%～8.3%，阴性对照组为7.8% ，阳性对照组为71.8%，实验组与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05），阳性对照组与阴性对照组比较差异极显著（P<0.01）。
2.3 Ames试验按Ames标准方法［6］对鼠伤寒沙门氏突变型菌株TA97，TA98，TA100，TA102进行增菌培养后进行鉴定，所采用的4个菌株特性均与Ames试验标准相符。在加与不加活化物的条件下进行平板掺入法试验。杜仲提取物用双蒸馏水稀释为 500，400，300，200 μg/皿4个剂量组，阳性对照为叠氮钠（NaN3）10 μg/皿，阴性对照为双蒸馏水100μg/皿，每个剂量组重复做2个平皿，结果见表3。
表3 杜仲提取物对TA平均回变菌落数的影响（略）
+S9:加S9活化物，-S9:不加S9活化物

表3可知，不同剂量的杜仲提取物，无论加或不加S9活化系统，其回变菌落数与阴性对照组（双蒸馏水）比较，均无高于自发回变菌落数的2倍，而阳性对照组菌落数均高于阴性对照组的2倍以上。
3 讨论

不同剂量杜仲提取物对小鼠PCE的试验表明，杜仲提取物稀释液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响（P<0.01）。说明本品对细胞染色体无诱变作用。对小鼠精子畸形的影响试验，结果表明，杜仲提取物稀释液对小鼠精子畸形发生率未见明显影响（P<0.01），说明本品对小鼠精子无畸形诱变作用，戚向阳等［7］用杜仲粉对小鼠精子进行的药理作用研究结果表明，杜仲粉对小鼠精子不产生畸变作用，其结果与本研究结果一致。

采用鼠伤寒沙门氏突变型菌株TA97，TA98，TA100，TA102进行回复突变试验，结果表明，不同剂量的杜仲提取物，无论加或不加S9活化系统，其回变菌落数与阴性对照组（双蒸馏水）比较，均无高于自发回变菌落数的2倍，而阳性对照组菌落数均高于阴性对照组的2倍以上，说明杜仲提取物稀释液对鼠伤寒沙门氏突变型菌株无致突变作用。

以上实验结果可知，张家界产杜仲提取物对受试物无致突变作用。
【参考文献】
［1］董娟娥，马柏林，张康建，等.杜仲籽油中a-亚麻酸的含量及其生理功能［J］.西北林学院学报，2002，17（2）：73.

［2］唐建军，张禄源，何鸣筱，等.杜仲的研究与应用进展［J］.植物学通报，1998，15（6）：48.

［3］刘月凤，陈建文，龚朋飞，等.杜仲提取物的亚慢性毒理学研究［J］.时珍国医国药，2006，17（11）：2185.

［4］中华人民共和国国家标准，GB15193.5-1994 骨髓微核试验［S］.

［5］纪云晶.实用毒理学手册［M］.北京：中国环境科学出版社，1993：93.

［6］中华人民共和国国家标准.GB15193.4-1994 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验［S］.

［7］戚向阳，陈维军，张声华，等.杜仲粉的药理作用及其有效成分特性研究［J］.中国食品学报，2002，2（4）：42.

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