超声波法提取金银花中的绿原酸 |
发布时间:2010-10-19 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2399 |
尹 波, 王科军 (赣南师范学院化学与生命科学系, 江西 赣州 341000) 摘 要:采用超声波法提取金银花中的绿原酸,并与水提法进行比较。采用薄层层析法进行分离。用紫外分光光度法测定绿原酸的含量。实验结果为:超声波法的提取率大大高于水提法,所需时间比直接用水提法所需时间缩短一半,提取条件温和,操作简单,平均收率为19. 07 %。 关键词:超声波法; 水提法; 金银花; 绿原酸 金银花[1 ] 为忍冬属( L onicera japonica Thunb. ) 忍冬植物的干燥花蕾,为中医常用药,具有清热解毒,凉风散热,抗病毒,保肝利胆的功能。其主要活性成分为绿原酸。我国作为金银花产地,在金银花炮制、有效成分分析、含量测定等方面取得了很好的研究成果[2 ] 。对金银花这一清热解毒中药的研究处于世界领先地位。金银花中绿原酸的提取方法有传统的水提法、乙醇回流法、水提醇沉法、酶解法、微波法等。超声波提取[3 ] 作为一种新型的提取技术,在天然产物提取方面得到广泛的应用,具有被提取活性物质不被破坏,提取时间短等优点。但用于金银花中绿原酸的提取未见报道。本研究采用超声波法提取金银花中的绿原酸,取得了满意的结果。 1 实验部分 1. 1 仪器与试剂 超声波发生器( KCT- Ⅲ型数控,昆山市超声仪器有限公司) ,旋转蒸发仪(上海生申科技公司) ,分析天平(CG- 328 型) ,紫外可见光分光度计(722 型光栅分光光度计,上海精密科学仪器有限公司分析仪器厂) ,循环水真空泵(SHZ- Ⅲ型,上海仪表(集团) 供销公司) ,活化的硅胶G 板(自制) ;金银花(购于赣州友邦大药房,干燥粉碎后备用) ,石油醚,乙酸乙酯、甲酸、乙醇、绿原酸均为分析纯。 1. 2 水提法实验 为了与超声波法相比较,先用水提法对绿原酸进行了提取,具体方法为:取6 g 干燥并粉碎的金银花粉末于80 ℃的水浴下加热3 次,每次1 h ,将提取液在60 ℃条件下减压浓缩至5 mL 左右,石油醚脱色,浓缩液稀释,测其紫外吸收。 1. 3 超声波提取法实验 取6. 0 g 金银花于烧瓶中,用适量蒸馏水分两次提取,每次用超声波处理提取一定时间后,分离出提取液,合并两次提取液,使用薄层层析分离,再使用紫外分光光度计进行测定。 1. 3. 1 硅胶吸附薄层层析- 紫外分光光度法[4 ] 将样品点于活化的硅胶G板上,以乙酸乙酯∶甲酸∶水= 10∶2∶3 展开,紫外灯下观察有蓝色斑点的为绿原酸, 刮下斑点, 用80 %乙醇洗脱,洗脱液定容至5 mL ,于330 nm 处测吸收值, Rf = 0. 65 。用标样进行吸收值的测定,确定绿原酸提取液的最大吸收波长,并计算出相应含量。 1. 3. 2 标准曲线的绘制 利用高精度分析天平,称取绿原酸标准品0. 0044 g ,溶于25mL 蒸馏水中,然后利用该母液配成各种标准浓度, 用722 型紫外可见分光光度计在330 nm 下测定不同浓度绿原酸的吸光度,结果如表1 。 根据表1 数据绘得图1 。 依据此标准曲线可得回归方程式 Y = A + B X 式中: A = 0. 12833 ; B = 0. 02272 ; X —绿原酸的浓度(ug/ mL) ; Y —吸光度。 1. 3. 3 样品液中绿原酸的含量测定 称取样品6. 0 g 放入25 mL 容量瓶中,加2 %的抗氧化剂a 水溶液,定容至25 mL ,提取,过滤,再对渣进行同样提取,合并两次提取的样品液,浓缩至5 mL 左右,石油醚脱色,用薄层层析法分离出各组分,刮下在紫外外灯下呈蓝色的荧光斑点,用80 %乙醇(加2 %抗氧化剂a) 洗脱,并定容至5 mL ,置1 mL 石英皿中,用紫外分光光度计在220~520 nm 处扫描测得样品液与标准液最大吸收波长相同,均为330 nm。于330 nm 处测定样品液吸收值,查标准曲线,算出百分含量。 2 结果分析 2. 1 水提法产品收率 平行做3 次水提取实验,分别得绿原酸0. 6851 g ,0. 6892 g ,0. 6724 g ,平均收率为11. 37 %。 2. 2 超声波提取法中各种因素对产品收率的影响 2. 2. 1 样品预浸泡时间对产品收率的影响 在超声波提取时间为30 min、提取温度为30 ℃的条件下,对样品进行不同时间的预浸泡,然后按1. 3 节方法提取。结果如表2 ,预浸泡时间越长,收率越大,但超过24 h ,差异很小,所以预浸泡时间定为24 h 。 2. 2. 2 超声波提取时间对产品收率的影响 在预浸泡时间为24 h 、提取温度为30 ℃的条件下,对样品按1. 3 节方法进行不同超声波提取时间的实验,结果如表2 ,超声波处理时间越长,收率越大,但30 min 后的差异很小,所以超声波处理时间定为30 min。 2. 2. 3 超声波提取温度对产品收率的影响 在预浸泡时间为24 h 、超声波处理时间为30 min 的条件下,改变超声波的提取温度,对样品按1. 3 节中的方法提取,结果如表2 ,温度的影响不是很大,选用室温即可,实际上整个超声波提取过程是个温度不断升高的过程。 2. 2. 4 超声波法提取的最佳条件和产品收率 根据实验结果,综合各种影响因素,超声波法提取金银花中的绿原酸的最佳条件为:室温下,先将样品浸泡24 h ,分两次提取,每次超声波处理30 min ,合并两次提取液,浓缩,石油醚脱色,用薄层层析分离,再用紫外分光光度法测定其含量。 在最佳条件下做3 次实验,原料6 g ,分别得绿原酸1. 1440 g ,1. 1436 g ,1. 1442 g ,平均收率为19. 07 % ,比水提法提高了7. 7 个百分点。 2. 3 分离精制与含量测定 纯薄层层析法用于分离效果很差,不适宜于定量分析,只适用于定性分析,而单纯的紫外光光度法常用于定量分析,用于定性时,样品的处理要求较高,操作复杂。但将这两种方法有机的结合起来却能较方便的进行定性分析,定量测定。 3 结论 3. 1 由水提法与超声波法提取金银花所得的主要成分是相同的,这两种方法的主要差别是超声波法提取绿原酸的收率较高,而且提取时间短,条件温和,是一种较好的方法。 3. 2 样品的预浸时间越长、超声波提取时间越长、超声波温度越高,提取收率也越高。最佳实验条件为:室温下,先将样品浸泡24 h ,分两次提取,每次超声波处理30 min ,合并两次提取液。 3. 3 用薄层层析法及紫外光度法结合能较方便地对产品进行定性、定量测定。 参考文献: [1 ] 郑敏燕. 超声波法提取紫丁香中丁香油的研究[J ] . 青海师范大学学报,2003 , (3) :32- 33. [2 ] 林丹,赵国玲,刘佳佳. 金银花不同提取方法的绿原酸比较研究[J ] . 天然产物研究与开发,2003 ,15 (2) :124-125. [ 3 ] 蔡霄英,刘永乐. 金银花中绿原酸的分离与测定新方法[J ] . 食品科技,2003 , (5) :104- 106. [4 ] 武雪芬,景小琦,李国茹. 金银花中药用成分的提取及抑菌试验[J ] . 天然产物研究与开发,2001 ,13 (3) :43-44. [5 ] 周瑾,闫小燕,贺高江,等. 微波提取银档黄酮苷的方法研究[J ] . 天然产物研究与开发,2001 ,14 (1) :42- 44. 产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |