双波长薄层扫描法测定夏枯草中熊果酸的含量 |
发布时间:2010-10-10 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2360 |
白 洁1, 2 , 陈翔飞1 , 孙海峰1 (1. 深圳清华大学研究院,广东深圳 518057; 2. 清华大学,北京 100084) 摘要:目的测定夏枯草中熊果酸的含量。方法薄层扫描法。结果熊果酸在0. 314~1. 570μg范围内与峰面积积分值线性关系良好( r = 0. 999 2) ,平均回收率为99. 3% ,精密度实验RSD = 1. 86%。结论该方法可用于夏枯草的质量控制。 关键词:夏枯草; 熊果酸; 薄层扫描法 夏枯草系唇形科多年生植物夏枯草Prunella vulgaris L. 的干燥果穗。主产于江苏、安徽、河南、浙江等地,其它各省亦产。具有清肝火、散郁结、降血压等功效[ 1 ]。本文通过采用双波长薄层色谱扫描法,测定其中熊果酸成分的含量,以控制药材质量。 1 仪器与试药 CAMAG 3 (瑞典) 薄层色谱扫描仪、Sartorius BS 210 S (德国)电子天平。熊果酸:由中国药品生物制品检定所提供,批号074229909;薄层层析硅胶G(青岛海洋化工厂) ;薄层板:自制硅板G板(20 cm ×20 cm) ;所有试剂均为分析纯。夏枯草药材:由深圳市一致药店及深圳市福田农批市场购买,产地湖北和河南。 2 方法与结果 2. 1 薄层色谱条件薄层板为硅胶G板,取硅胶G与0. 4%CMC2Na水溶液按1 ∶3 比例研匀铺板, 厚度0. 3 mm, 阴干,105℃活化30 min,以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯( 20∶ 5∶8)为展开剂,预饱和30 min,每个样品点成4. 0 mm ×1. 0 mm长条状,放入展开缸内上行展开10 cm,喷以10%硫酸乙醇溶液,于100℃显色5 min,采用双波长反射式锯齿扫描,以540 nm 作为测定波长, 700 nm作为参比波长,狭缝大小: 2. 0 mm ×0. 2mm。 2. 2 对照品溶液制备精密称取熊果酸对照品适量,加95%乙醇溶解制成每毫升含0. 314 mg的溶液。 2. 3 供试品溶液分别精密称取夏枯草药材粗粉约1 g,加入25ml 95%乙醇超声提取30 min,过滤,滤渣继续加入20 ml 95%乙醇超声提取20 min,过滤,合并两次滤液, 70℃水浴蒸干,残渣用石油醚(60~90℃)浸泡两次,共15 ml, 2 min /次,倾出石油醚液,挥干溶剂,用95%乙醇溶解并转移至10 ml容量瓶中定容,摇匀,即得。 2. 4 峰纯度检查样品及熊果酸对照品相同Rf值处,进行200~700 nm全波段光谱扫描,比较样品与对照品吸收光谱图的相似性,并确定最大吸收波长。结果见图1。选择样品与对照品吸收峰最大值,及前后85%峰位进行峰纯度检测。结果见表1。 2. 5 线性范围考察精密吸取对照品溶液1, 2, 3, 4, 5 μl ,分别点于同一薄层板上,依上述条件展开,显色后扫描,以熊果酸的量(μg) 为横坐标X,吸收峰面面积积分值为纵坐标Y,回归得方程: Y = 6. 244X - 1 010. 426, r = 0. 999 2。结果表明,熊果酸的含量在0. 314~1. 570μg范围内,呈良好线性关系。 2. 6 稳定性实验取同一薄层板上点样量相同(3μl) 的5个对照品斑点,每隔5 min 扫描1 次,取每次5个点的平均值。结果表明,熊果酸在15 min内扫描基本稳定, RSD = 3. 61 % ( n = 5) ,以后随时间延长,吸收峰面积显著减少。 2. 7 同板精密度实验精密吸取对照品溶液(3μl) 点于同一薄层板上,依法展开,显色后扫描, RSD = 1. 86% ( n = 5) 。 2. 8 异板精密度实验取5块薄层板分别点5个点样量相同的对照品斑点(3μl) ,依法展开,显色后扫描,求出每块板5个点的平均值, RSD = 3. 17 % ( n = 5) 。 2. 9 重复性实验取供试品(批号060210) 5份,按样品测定方法分别测定其含量计算RSD = 1. 94 % ( n = 5) 。 2. 10 回收率实验取已知含量的样品( 批号060210) 约1 g,精密称定,再精密加入熊果酸对照溶液4. 5 ml,按供试品溶液制备方法制成加样回收实验液。依法点样,展开,显色后扫描,测得其平均回收率为99. 3% , RSD = 3. 23 % ( n = 5) 。 2. 11 样品测定精密吸取供试品溶液7μl,对照品溶液2μl与5μl,交叉点于同一薄层板上,依法展开测定,按外标两点法计算。结果见表2。 3 讨论 通过薄层板展开,样品与熊果酸对照品相同Rf值处斑点全波段扫描图谱可见,各批次夏枯草样品与对照品有相似的吸收光谱图,并且最大吸收在540 nm附近,因此选择540 nm作为检测波长,为了扣除背景吸收,选择700 nm为参比波长。如表1峰纯度考察的结果,可见以99%作为峰纯度的检测限,可以认为各样品对应Rf值处均为单一物质熊果酸吸收峰,检测结果可以排除其它杂质成分的干扰。通过采用薄层扫描法对夏枯草药材中熊果酸含量测定的方法学考察,可见此种含量测定方法操作简便、结果准确,可以作为夏枯草中熊果酸含量测定方法。经过检测,河南及湖北产的共六批次夏枯草药材,其中熊果酸的含量均达到《中国药典》(2005年版)大于0. 12%的含量要求[ 2 ]。 参考文献: [ 1 ] 江苏新医学院. 中药大辞典[M ]. 上海: 上海科学技术出版社,2001: 1827. [ 2 ] 国家药典委员会. 中国药典, Ⅰ部[ S ]. 北京: 化学工业出版社,2005: 198. 产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |