HPLC法测定双黄连胶囊中金银花的绿原酸含量 |
发布时间:2010-09-27 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2624 |
黄曦(福州市药品检验所福州350001) 摘要:目的测定双黄连胶囊中金银花(以绿原酸计)含量。方法高效液相色谱法。色谱柱为C18 柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(25:75:1);流速1mL·min-1;检测波长325nm;柱温30℃。结果绿原酸在22.8μg·mL-1~114.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为101.4%,RSD为1.3%。结论该方法可用于双黄连胶囊中绿原酸的含量测定。 关键词:双黄连胶囊;金银花绿原酸;含量测定;高效液相色谱 本文采用HPLC法,对流动相进行优化,用外标法测定绿原酸含量,操作简便快速,结果可靠,稳定,重现性良好,组份分离度佳。 1 仪器与试药 Agilent-1100型高效液相色谱仪;VWD紫外检测器,BP211D型电子分析天平,绿原酸对照品(中检所);双黄连胶囊(批号为040511,050301,050501,由竹林众生制药公司提供);甲醇为色谱纯;水为超纯水;冰乙酸(分析纯)。 2 试验方法 2.1 检测波长的确定取绿原酸对照品适量用25%的甲醇溶解成60μg· mL-1溶液,在200~500nm 波长范围内扫描,确定最大吸收波长为325nm。 2.2 色谱条件色谱柱:十八烷基键合硅胶柱(5μm;250mm×4.6mm),流动相:甲醇-水-冰醋酸(25:75:1);流速1mL·min-1;检测波长325nm;进样量:10μL;理论塔板数不低于6000。(见图1、2)。 2.3 阴性对照依上述色谱条件分别吸取样品及溶剂、对照品10μL进行测定。样品与对照品色谱图中在相同的保留时间有一个色谱峰而溶剂无此峰。 图1 (绿原酸对照品色谱图) 2.4 线性关系精密称取绿原酸对照品4.5mg于100mL量瓶中,用25%甲醇溶解并稀释至刻度。摇匀在上述色谱条件下,分别进样5~25μL。以绿原酸峰面积(A)对样品含量(Amt)进行回归,得到回归方程为:A=1926.6438×Amt+45.1272,r=0.9961。结果表明:绿原酸在22.8μg·mL-1~114.0μg·mL-1范围内线性关系良好。 2.5 精密度和稳定性实验精密称取绿原酸对照品4.56mg,用25%甲醇溶解成45.6μg·mL-1溶液,取10μL重复进样5次,峰面积的RSD为0.2%。 2.6 加样回收率测定精密称取绿原酸对照品7.59mg用25%甲醇溶解成75.9μg·mL-1的绿原酸溶液,精密量取已知含量的双黄连胶囊样品3份各10mL于15mL容量瓶中,分别加入上述对照品溶液1.0mL,1.2mL,1.5mL,并用25%的甲醇稀释到刻度,按样品含量测定方法项下进行测定,计算回收率。结果3批中浓度回收率分别为101.5%,101.4%,101.3%。每种浓度进样2次,RSD 为1.3%。 2.7 样品含量测定精密量取本品浓液(浓度约为50μg·mL-1)10μL注入液相色谱仪,记录色谱图。另精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品,用25%的甲醇稀释成46.5μg·mL-1的溶液,同法测定:3批号040511、050301、050501样品含量(mg/粒)分别为18.40、16.68、17.86;RSD分别为1.92%、0.55%、1.76%。 3 讨论 3.1 绿原酸在25%甲醇溶液中在325nm处有最大的吸收,且无其他干扰,故选择325nm为检测波长。选用甲醇-水-冰乙酸(25:75:1)为流动相,能使绿原酸得到良好分离。 3.2 本方法中绿原酸的峰面积与浓度在一定浓度范围内呈良好线性关系,回收率高,无杂质干扰,可作为含量测定方法。 参考文献 [1]《双黄连制剂含量分析方法综述》2004.18(3)~194496. [2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2005,I部. 产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |