杜仲颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第十册(编号：WS3一B一1938-95)。由杜仲、杜仲叶2味药组成，具补肝肾，强筋骨，安胎，降血压之功效，临床上用于肾虚腰痛，腰膝无力，胎动不安，先兆流产，高血压症。原质量标准中，未对成品进行含量控制。文献报道[1,2,3,4]。 ，杜仲的化学成分主要含木脂素类、环烯醚萜类及杜仲胶等，杜仲叶含木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类化合物、黄酮类、氨基酸及微量元素等成分，其中二者均含有绿原酸，绿原酸含量测定方法有薄层扫描法[5,6,7 ]、高效液相色谱法[8,9,10]等。本文采用HPLC法测定杜仲颗粒中绿原酸含量，为该制剂质量标准的改进提供实验依据。

l.仪器与试药

岛津公司LC．2010A高效液相色谱仪，SPD．川OAvp二极管阵列检测器，CLASS·VP色谱工作站，sartoriusBP211D电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。绿原酸对照品(110753200212，中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余为分析纯；样品：杜仲颗粒(批号：040401、040601、040602、040603，某有限责任公司)。

2.方法与结果

2．1 色谱备件

色谱柱：Shim—pack VP—ODS(4．6 mm×150 mm，5 m)；流动相：乙腈-0．4％磷酸溶液(9：91)；流速：1．0 ml/min：柱温：35。C；枪测波长：327 nm。结果：绿原酸峰与相邻峰的分离度大于1．5，峰形对称，理论板数以绿原酸峰计算大于2500。缺绿原酸阴性对照无干扰。

2．2 溶液的制备

2．2．1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，加50％甲醇制成每l mL含50 mg的溶液，即得。

2．2．2 供试品溶液的制备取本品，研细，取1．0 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加50％ 甲醇约2O mL，超声处理(功率150 W，频率50 KHz)30 rain，放冷，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，离心，即得。

2．2．3 缺绿原酸阴性对照溶液的制备取缺绿原酸阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2．3 线性关系精密称取绿原酸对照品l3．35 mg，置25mL量瓶中，加50％ 甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1．5 mL置10 mL量瓶，作为对照品溶液；分别精密吸取此对照品溶液1，2，4，10，16μl ，按上述色谱条件进行分析，测定峰面积，以进样量x( g)对峰面积Y进行线性回归，得回归方程为：Y=2．181 0×10 X一2．119 9×10 ，r=0．999 9；表明绿原酸在0．08一1．28 g之间呈良好的线性。

2，4 精密度试验分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液(批号040401)各10．0μl，按上述色谱条件连续进样5次，测定峰面积。结果对照品RSD =1．46％，样品RSD=1．28％ 。

2．5 稳定性试验取样品(批号040401)适量，按供试液制备方法制备供试液，与上述对照品溶液于0，1，2，4，8，16 h分别精密吸取10．0μl ，按上述色谱条件测定。结果对照品RSD=0．88％ ，样品RSD=1．94％ 。表明对照品溶液、样品溶液在16 h内测定基本稳定

2．6 重复性试验取样品(批号040401)1．0 g共5份，按样品分析方法进行测定，测得平均含量为0．129％，RSD：1．68％。

2．7 加样回收率试验取样品(批号040401)适量，6份，分别加入一定量的绿原酸对照品(C=0．2977 mg／mL)1．5，2，2．5 ml ，按样品分析方法进行处理，并各平行测定2次，结果见表1，如表所示。本方法加样回收平均回收率为100．1％，RSD：1．39％。表明回收率的重现性较好。

3 样品测定

按上述色谱条件，对3批样品(批号：040601、040602、040603)进行测定，结果本品每l g颗粒含绿原酸(c．6 H．09)分别为0．93，1．18，1．07 mg。

4 讨论

4．1 指标成分的选择目前，绿原酸含量测定较多，但尚无杜仲颗粒中有关绿原酸含量测定的文献报道。《中国药典》2000年版一部杜仲项下收载了有关含量浸0定，但经多方联系无法购买到供含量测定用对照品：松脂醇二葡萄糖苷。经文献查阅，杜仲、杜仲叶中均含绿原酸，经上网查询⋯ ，《中国药典)2005年版一部将收载杜仲叶绿原酸含量测定方法，故选择绿原酸作为指标成分进行含量控制。阴性选用缺杜仲、杜仲叶样品。

4．2 检测波长的选择实验曾对绿原酸对照品及供试品色谱叶1绿原酸峰在SPD—M10Avp二极管阵列检测器上进行扫描，结果：二者均在327 nm波长处有最大吸收，实验选择327nm作为检测波长。

4．3 流动相的选择实验曾以叶=I醇一水一甲酸(30：70：1)、乙腈一2％ 乙酸(15：85)、乙腈旬．4％磷酸溶液(15：85)、乙腈一0、4％磷酸溶液(9：91)为流动相，流速：1 mL／min，以Shim—pack VP—ODS柱为分析柱，桂温35。C，进行试验研究，结果前i个条件均未达到满意的分离效果；而最后一个条件中绿原酸峰已达基线分离，绿原酸峰虽略拖尾，但小影响最后分析结果；缺杜仲及杜仲叶阴性埘照样品均无干扰。实验最终选用乙睛-()．4％磷酸溶液(9：91)为流动卡H，流速1．0 mL／min，十}温：35。C

4 4 分析柱的选择实验发现色潜柱埘样品巾绿原酸的分离仃较大影响，曾用Diamonsil(钻石)C，住(4．6 mm×150mm，5 m)Lj Kromasil Cl H柱(4．6 mill×150 mm，5 m)柱，以乙腈旬．4％磷酸溶液(9：91)为流动桐，二者均未达到满意的分离效果，绿原酸峰与相邻峰末达到基线分离，后以Shim—pack VP—O1)S(4．6 mm×l50 mm，5 m)作为分析柱，结果绿

原酸峰与桐邻峰分离度大于1．5，理论塔板数以绿原酸峰计算均大于2500。方法学研究实验选用Shim-pack VP—ODS(4．6 mill×150 mm，5 Ixm)色谱柱。

4．5 提取条件的选择供试液制备中，对提取溶剂(甲醇、乙醇、50％甲醇)，提取方法(回流、超声)，提取时间(15、30、45 min)进行了考察。结果用50% 甲醇超声处理30 min为最佳提取条件。

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[lI] 中闰药典2005年版内容公示．http：／／www．chp．org on／2005gs／zl／gsz1．him．

产品链接：

杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸

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