银翘天甘复方制剂中绿原酸的测定 |
发布时间:2010-09-10 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:3873 |
辽宁医学院 王宏军蒋红 王春华 姚健 【摘要】本实验旨在探索建立银翘天甘复方制剂中绿原酸含量的检测方法。采用紫外分光光度法(Uv),检测波长为327 am;薄层色谱法(TLC),展开剂为乙酸丁酯一甲酸一水(7.5:2.5:2.5)。结果表明:绿原酸浓度为2.5~15斗g/mL时有较好的线性关系,回归方程:A=0.1897C-0.0033,r=0.9997(n=5),回收率为99.4%,RSD为0.2%。薄层色谱能将复方制荆中的绿原酸很好的分离出来,样品中的绿原酸比移值(R.f值)=0.28+0.01(n=5),与对照品之间的R.f值基本一致。银翘天甘复方制剂中舍有绿原酸,且uv、TLC可作为银翘天甘复方制剂中绿原酸的定性分析检测方法。 【关键词】银翘天甘;绿原酸;紫外分光光度法;薄层色谱法 银翘天甘复方是由金银花、连翘、天花粉和甘草组方而成,具有清热解毒、抗菌消炎、增强机体免疫等功效,该复方制剂常以君药金银花中的绿原酸(CHA)为主要检测目标。目前金银花中CHA的含量测定多采用紫外分光光度法(UV)和高效液相色谱法(HPLC)(任占军等,2007;冯文字等,2006)。本文采用UV、薄层色谱法(TLC)对银翘天甘复方制剂中的CHA进行测定。 1材料与方法 1.1 实验材料与仪器 1.1.1材料金银花、连翘、天花粉、甘草购自辽西国药店;硅胶G粉(青岛海洋化工厂,批号:20020523)、羧甲基纤维素钠(CMC),上海化学试剂站分装厂(批号:921224);绿原酸标准品,中国药品生物制品检定所(批号:110753—200413):无水乙醇、甲醇、乙酸丁酯、甲酸均为分析纯.购自辽西化学试剂公司。 1.1.2仪器UV757CRT紫外可见分光光度计,上海三精科有限公司;KQ一300B型超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司:索氏提取器,上海 玻璃仪器有限公司;旋转蒸发仪RE一5203.上海压荣生化仪器厂;薄层手动涂敷器.武汉药科新技术开发有限公司;ZF_4型紫外透射反射分析仪。 上海康禾光电仪器有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1制药称取粉碎过60目筛的金银花40 g、连翘40 g、天花粉40 g、甘草40 g混匀,用70%乙醇作为溶媒,采用改良索氏提取法(王宏军等。 2003),提取6—8 h,减压浓缩,干燥得浸膏。1.2.2绿原酸UV定性分析(1)外标法:精确称取绿原酸标准品2 mg,用50%甲,醇溶解定容至10 mL;精确称取浸膏3.000 g用50%甲醇溶液溶解,配成浓度为0。3 mg/mL样品:用UV757CRT型紫外可见分光光度计于200。400 nm范围内扫描,可以得到标准品、样品的紫外图谱,若在样品中含有与对照品相似或一样的化学物,在UV图谱相同位置处将有类似的吸收峰。 (2)内标法:在外标法的基础上,于样品中滴加20¨L标准品,得到另外一组UV图谱,与样品图谱进行比对,若样品中含有与对照品相似或一样的化学物,会在同一吸收波长处出现一个峰高大于样品的吸收峰。 1.2.3 TLC定性分析色谱条件:硅胶G板(自制),展开剂:乙酸丁酯一甲酸一水(7.5:2.5:2.5),样品与标准品分别点样10斗L,点样后饱和30 min,上行法展开,室温,365 nm紫外检视。若样品中含有与对照品相似或一样的化学物。在薄层板同一位置会发出相同的荧光,具有相同的比移值(Rf值)。胙原点中心的距离到色斑中心距离/原点至展开剂前沿距离。 1.2.4绿原酸定量分析准确称取绿原酸标准品2 mg,用50%甲醇作为溶媒,配成浓度分别为2.5、5、7.5、10、12.5、15¨g/mL标准溶液。用1.2.2中外标法获得的绿原酸最大吸收峰波长检测吸光度值(A),在一定波长下,浓度一A呈线性关系,可以绘制绿原酸的标准曲线并得其线性方程。将样品稀释后按照标准品相同测定方法可以测得样品的吸光度值,代入线性方程中。即得样品中绿原酸的含量。 1.2.5加样回收率实验准确称取已知含量的同一批样品0.18 g,共5份,分别加入与样品中绿原酸相当的标准品,按供试品溶液制备方法处理并进样测定。计算公式如下: 1.3数据处理方法利用Microsofter officer Excel求标准曲线及其标准方程.对重复数据进行t检验或F检验。 2结果与分析 2.1 绿原酸最大吸收波长本实验扫描获得的绿原酸最大吸收峰波长为327 am,与《中国兽药典》(2005)报道一致。 2.2定性分析结果 2.2.1 UV分析结果外标法测定结果见图1,箭头所指为样品与标准品在同一波长下具有相似吸收峰的位置。内标法分析结果见图2,箭头所指为样品与添加标准品发生变化的位置,通过UV图谱可以认为银翘天甘复方中含有绿原酸。 2.2.2 TLC分析结果由于绿原酸在345 am紫外光照射下会发出蓝色荧光。铅笔标记结果见图3,由此可知样品中含有绿原酸。在色谱图3中1为阴性对照,2、3为样品,4为绿原酸对照品。样品、标准品的Rf值见表l,二者之间无显著差异。 2.3定量分析结果分别在327 nm处测的不同浓度绿原酸标准品的吸光度值,结果见表2。线性回归方程为A=0.1897C-0.0033,r=O.9997(n=5)。将样品稀释成0.18 mg/mL,测得其吸光度值为0.661(n=5),代入标准曲线方程中即得检测样品中绿原酸含量为3.5ug/ml。由此可知银翘天苷复方制剂中含绿原酸为1.94%。 2.4加样璃牧率实验结果绿原酸UV法燕样回收率试验结果见表3。加样平均网收率为99.4%,RSD为0.2%。 3讨论 3.1 中药复方制剂成分定性分析的方法 长期以来TLC作为中药成分检测分析的重要手段,具有设备简单、操作方便、分离速度快等特点(张岩等。2008),尤其是对于中药复方制剂检测方法的探索发挥着重要的作用。本文探索了以UV和TLC作为自制银翘天甘中药组方制剂中有效成分绿原酸的检测方法,结果显示银翘天甘中药组方制剂中含有绿原酸,而且UV与TLC方法简便、快速、准确。可以作为银翘天甘复方制剂有效成分绿原酸的定性检测方法。 3.2 中药复方制剂成分定量分析的方法 本文利用UV法对银翘天甘复方制剂中有效成分绿原酸进行定量检测。其测定结果中UV标准曲线方程的相关度r=0.9997,表明在327 nm处测定绿原酸标准品浓度与吸光度之间有良好的线性关系。但由于样品中成分较多,对吸光度有一定的影响,使其吸光度偏大,而绿原酸含量却比较少,由此表明用UV法作为中药复方制剂成分定量分析不太适合,银翘天甘复方制剂有效成分绿原酸的定量检测方法还有待予进一步的研究。 参考文献 [1]冯文宇,田吉,何兵。金银花与川银花绿原酸含量及提取率实验研究[J]. 中药材,2006,29(1):30—31. [2]任占军.谷学新,侯士纂,等.HPLC法测定速感冒片中绿原酸的含量 [J].药物分析杂志,2007,27(5):752—753. [3]王宏军,吴国娟,李焕荣,等.金银花中绿原酸提取物方法的筛选及其抑菌作用[J].北京农学院学报.2003,18(4):262—265. [4]张岩。曹国杰。张燕.等.黄酮类化合物的提取以及检测方法的研究进展[J].食品研究与开发,2008,29(1):154—158. [5]中国兽药典委员会.金银花[M].中国兽药典[M].2005.VolⅡ《二部):220. 产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |