反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剂中绿原酸的含量 |
发布时间:2010-09-09 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2461 |
黄喜茹 ,曹冬,高洁,张雪,付超美 (河北医科大学药学院,河北石家庄050017) 摘要:建立测定鼻炎滴剂中绿原酸含量的方法。利用RP-HPLC法,采用Diamonsil (钻石)cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 m),以甲醇一水一冰醋酸(25:75:1)为流动相,流速1.0 mlMmin,检测波长328 nm,用RP.HPLC法测定金银花的活性成分 绿原酸,在4、34 30.38 g/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,回归方程为:A:263 232c+120 130,相关系数r= 0.999 5。绿原酸的平均回收率100.5%(RSD=0.86% ,n=3)。方法简便、快速,被测组分与其他组分色谱峰分离良好。 关键词:鼻炎滴剂;绿原酸;反相高效液相色谱法 鼻炎滴剂是中西复方溶液制剂(喷雾剂),主要成分为金银花提取液、辛夷油、冰片、黄芩苷、盐酸麻黄碱等,具有散风、清热、通窍之功能,临床用于风热蕴肺型急慢性鼻炎。鼻炎滴剂的质量控制方法,已报道有用高效液相色谱法测定其中盐酸麻黄碱的含量ll J,还有以黄芩苷为质控指标的分光光度法l2 J,但以投药量较大的金银花的有效成分绿原酸作为质量控制指标的方法目前还未见报道。本文参考文献[3-6],研究建立了测定鼻炎滴剂中绿原酸含量的反相高效液相色谱法,对控制鼻炎滴剂的质量具有一定意义。 1 实验部分 1.1 主要仪器与试剂 美国Waters高效液相色谱仪:510泵,2487紫外检测器,N2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息研究所);JA1203A型电子天平(上海精密科学仪器有限公司);TCQ.250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。化学对照品:绿原酸(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110753.200212)。供试品:鼻炎滴剂(市售规格:10 mlM瓶,广东佛山德众药业有限公司:批号06001;06012)。试剂:甲醇(进口色谱纯),冰醋酸(分析纯),重蒸水(自制)。 1.2 实验方法 1.2.1 色谱条件 色谱柱:DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6mm,5 m);流动相:甲醇 水.冰醋酸(25:75:1);流速:1.0 mlMmin;柱温:30 oC;检测波长:328 nm;进样量20ul。 1.2.2 对照品溶液制备 精密称取绿原酸对照品2.17 mg,加50% 甲醇制成绿原酸浓度为86.80 t~g/mL的对照品溶液。 1.2.3 供试品溶液的制备 精密量取2.0 mL鼻炎滴剂置于25 mL容量瓶中,加50% 甲醇稀释到刻度,摇匀,用0.45肚m微孑L滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液。 1.2.4 系统适用性实验 在上述色谱条件下,绿原酸的色谱峰与相邻峰的分离度>1.7,理论塔板数/7,>5 000。经紫外检测器检测,供试品中绿原酸的保留时间与对照品一致(见色谱图1)。 1.2.5 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液,加50%甲醇制成绿原酸浓度分别为4.34、8.68、13.02、17.36、21.70、26.04、30.38~g/mL的对照品溶液。按上述色谱条件,进样20 L,记录色谱峰面积。以峰面积A对浓度c(~g/mL)进行线性回归,求得回归方程。结果是绿原酸的线性范围为4.34~30.38 btg/mL,回归方程A=263 232c+120 130,r=0.999 5。 1.2.6 精密度试验 按上述色谱条件,各取线性关系项下对照品溶液20ul ,注入高效液相色谱仪,连续进样5次, 记录色谱图,结果绿原酸峰面积日内RSD 为0.81% 。 1.2.7 空白试验 按处方和工艺自配不含金银花的空白制剂,再按供试品溶液的制备方法制备并测定。结果空白溶液在绿原酸对照品相同保留时间处未出现色谱峰,故认为无干扰。 1.2.8 稳定性和重现性试验 取同一供试品溶液,在0、2、4、6、8、10 h分别一进样20ul ,记录峰面积,结果6次进样绿原酸的峰面积RSD为1.1%。取同一批号样品溶液(06001),按供试品溶液制备方法制备5份供试品 溶液,各进样20 ,测得绿原酸的平均含量为249.5~g/mL(RSD=1.2%)。 1.2.9 加样回收率试验 精密量取5.0 mL供试品溶液,加50% 甲醇制成10.0 mL,在上述色谱条件下,进样20ul ,测出绿原酸的含量,取5次测定的平均值作为基础值。 精密量取相同体积的供试品溶液3份,分别加入0.8、1.0和1.2 mL绿原酸对照品溶液,加50% 甲醇制成10.0 mL,在上述色谱条件下,进样20ul,测出绿原酸的总量,按标准加入法计算回收率,结果见表1。 2 样品的测定 取一种浓度的被测组分的对照溶液20uL进样,取峰面积的平均值,与试样液在相同条件下进样所得峰面积用外标一点法计算含量,结果见表2。 3 讨论 文献报道测定金银花及其制剂中绿原酸含量的方法很多,主要为高效液相色谱法 3 ]。按参考文献的方法或条件试验,绿原酸分离效果不理想,经试验最终选定甲醇.水冰醋酸(25:75:1)为流动相,色谱峰得到了很好分离。反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剂中绿原酸的含量。此法专属性好,灵敏度高,操作简便、易行,结果准确可靠,对鼻炎滴剂的质量控制有一定意义。 参考文献: [1]刘贵中.鼻炎滴剂中盐酸麻黄碱的含量测定[J].中药材,1998,21(4):205.206. [2]陈小坚,崔方祥.轱60.y射线辐照灭菌对鼻炎滴剂(喷雾型)中黄芩苷含量的影响[J].广东药学院学报,1998,14(4):276.277. [3]谢岱,林世和,余南才.HPLC法测定咽舒茶中绿原酸的含量[J].中国医院药学杂志,2005,25(5):430.431. [4]刘爱学,陈翠花,郭耀武..消癌平片中绿原酸的HPLC法测定[J].西北药学杂志,2005,20(2):56.58. [5]熊惠敏.HPLC法测定金银花口服液中绿原酸的含量[J].微量元素与健康研究,2003,2,0(4):41.42. [6]王东,姬生国.复方金银花擦剂中绿原酸的含量测定[J].河南中医学院学报,2003,18(2):36—37 . 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |