不同种獐牙菜中獐牙菜苦苷Swertimarin含量比较 |
发布时间:2010-08-23 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:5343 |
不同种獐牙菜中獐牙菜苦苷含量比较 肖怀,宋玉林,王胤,张桢(云南大理学院药学院,云南 大理 671000)
摘要:目的 比较不同品种獐牙菜植物中獐牙菜苦苷含量,为合理选择利用资源提供依据。方法甲醇超声提取獐牙菜植物中的活性成分,通过HPLC 测定其中的獐牙菜苦苷含量。色谱条件: ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,流动相为水-乙腈(92∶8),流速1 mL·min-1,柱温25 ℃,检测波长为238 nm。结果 獐牙菜苦苷在检测范围内线性良好(r=0.999 4),加样回收试验的平均回收率为99.2%,重复性试验RSD 为1.73%(n≥5)。几种獐牙菜中獐牙菜苦苷含量在0.58%~12.86%。结论 獐牙菜苦苷含量在獐牙菜属植物中种间差别比较大。
关键词:獐牙菜;獐牙菜苦苷;含量测定;高效液相色谱法 上禾生物
Content Compareing of Swertiamarin in Different Species of Swertia XIAO Huai, SONG Yulin, WANG Yin, ZhANG Zhen (Department of Pharmacy, Dali College, Dali 671000, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To compare the content of swertiamarin in different species of Swertia for reasonable resource exploitation. METHODS The components were extracted by ultrasonic methanol and swertiamarin content determined by HPLC.The chromatographic condition as follow: ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm, 5 m) column, the detection wavelength was set at 238 nm with mobile phase of water-acetonitrile (92∶8), flow rate of 1.0 mL·min-1 and column temperature of 25 ℃. RESULTS The calibration curve was in good linear relationship (r=0.999 4) with average recovery of 99.2%. The reproduction was 1.73%(n≥ 5). The content of swertiamarin varied from 0.58% to 12.86% in six Swertia herbs. CONCLUSION The content of swertiamarin was remarkable different in Swertia herbs. KEY WORDS: Swertia; Swertiamarin; content determination; HPLC
獐牙菜苦苷(Swertimarin)是龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia L.)植物中的主要成分之一。獐牙菜苦苷具有抗胆碱作用,在人体肠内菌作用下可分解产生具有抑制中枢神经系统(CNS)和胃液分泌、抗溃疡等活性物质,推测獐牙菜苦苷的抗胆碱作用可能与其降解产物有关[1]。从金沙青叶胆中分离得到的獐牙菜苦苷已成为解痉止痛新药,对小儿腹痛有较好的疗效。此外,獐牙菜苦苷对中枢神经系统具有镇痛和镇静作用,临床上应用有较好的改善睡眠效果[2]。獐牙菜苦苷皮肤吸收代谢产物可扩张毛细血管,激活和促进皮肤细胞的酶系统,提高皮肤的生化功能,还可以治疗脱发症和用于皮肤美容剂[2]。獐牙菜苦苷还具有抗癌作用[3]。獐牙菜苦苷的含量测定,特别是在獐牙菜属植物中的含量已有较多的报道[4-6],其含量种间差距比较大,但已有报道的几种獐牙菜中其含量一般都小于5%,有些品种则小于1%。笔者在前期系统研究观赏獐牙菜的化学成分时发现,该种植物提取浸膏的正丁醇部分,獐牙 菜苦苷的含量达到80%以上,根据总生药量计算,其含量远远大于所报道的其它种獐牙菜中的含量。为了比较系统的比较其种间差距,笔者通过甲醇超声提取, HPLC 测定了观赏獐牙菜(S. Decora Franch)、丽江獐牙菜(S. delaveyi Franch)、紫红獐牙菜(S. punicea Hemsl)、日本獐牙菜(S. japonica)、狭叶獐牙菜(S. anguslifolia)、宾川獐牙菜(S. binchuanensis)等不同产地的六种獐牙菜中獐牙菜苦苷Swertimarin(上禾生物)含量,为更合理有效的开发应用獐牙菜资源,或寻找獐牙菜苦苷植物源提供依据。 1 仪器和材料 Agilent 1100 高效液相色谱仪(真空在线脱气机,四元泵,自动进样器,柱温箱,DAD 检测器,Chemstation 化学工作站, 美国安捷伦公司) ,SY3200-T 超声仪(上海声源超声波仪器设备有限公司),FA2004N 电子天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)。獐牙菜苦苷对照品自观赏獐牙菜中提取分离得到,与标准品TLC 和混合熔点测定鉴定,经HPLC检测,1%自身对照品计算法计算纯度均大于99%(扣除溶剂峰),见图1。甲醇为分析纯,水为纯 化水,其它测试试剂为光谱纯。生药样品除日本獐牙菜得自日本富山县富山大学和汉药研究所外,其它均采自大理,经何廷农教授(中科院西北高原生物研究所)及大理学院生药学 教研室夏丛龙老师鉴定。标本现存于大理学院药学院药物标本室。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱:ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:水-乙腈(92∶8),流速:1 mL·min-1,柱温:25 ℃,检测波长:238 nm,进样量:10 μL。 2.2 对照品溶液配制 精密称取干燥衡重的样品约0.1 g,甲醇溶解于100 mL 量瓶中定容,备用。 2.3 样品溶液制备 精密称取獐牙菜风干粉碎样品3 g,用约30 mL甲醇超声提取30 min,过滤,重复提取3 次,合并滤液,定容到100 mL,备用。色谱图见图1(观赏獐牙菜)。 2.4 标准曲线绘制 分别精密量取浓度为1.075 mg·mL-1 的对照品溶液10,8,6,4,2,1 mL,用甲醇定容至10 mL。取少许,滤膜过滤,进样测定。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,得:Y=13.778 92X+64.114 06,r=0.999 4。结果表明在1.075~10.075 μg内线性关系良好。 2.5 仪器精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL,重复进样5 次,分别测定峰面积值,计算出獐牙菜苦苷RSD 为0.48%。 2.6 重复性试验 平行称取观赏獐牙菜5 份,每份约3 g,按“2.3”项下方法制备,在“2.1”项下色谱条件,各进样10 μL,测定獐牙菜苦苷Swertimarin(上禾生物)峰面积,计算出含量,结果RSD 为1.73%。 2.7 稳定性试验 取配制好的观赏獐牙菜样品溶液分别于1,2,4,6,8,12,24 h 进样10 L,样品峰面积 RSD为0.83%,说明样品在24 h 内稳定性良好。 2.8 加样回收率试验 平行称取观赏獐牙菜6 份,每份约1.0 g。于100 mL 烧瓶中,各加入5 mL 配制好的对照品溶液(浓度1.075 mg·mL-1),按“2.3”项下方法操作,得6 份提取液。进样测定獐牙菜苦苷峰面积,计算回收率为99.2%,RSD 为1.73%。 2.9 样品含量测定 取制备好的样品溶液,测定獐牙菜苦苷Swertimarin(上禾生物)峰面积。每种生药平行制备3 份,每份进样3 次,每次10 μL,各以平均峰面积代入方程求出相应含量。其中的观赏獐牙菜和狭叶獐牙菜,先取25 mL 稀释至50 mL 后再进样测定。结果见表1。
3 讨论 分别测定了超声提取5,10,15,20,25,30 min后提取液獐牙菜苦苷Swertimarin(上禾生物)含量,提取15 min 以后,提取时间对含量影响较小,为尽可能提取充分,选择30min 为样品提取时间。为提高检测灵敏度,选择獐牙菜苦苷Swertimarin(上禾生物)最大吸收波长附近的238 nm 作为检测波长。根据测定结果,该属植物中都含有獐牙菜苦苷,但种间差别较大,在观赏獐牙菜、狭叶獐牙菜中含量很高,甚至超过了10%。獐牙菜苦苷是獐牙菜属植物中的主要有效成分,具有多种生理活性,分析比较其含量的种间差别,可为该属植物的开发利用提供参考依据。观赏獐牙菜在云南有非常广泛的分布,可作为獐牙菜苦苷提取的药源植物。
REFERENCES [1] MA L N, TIAN C W, ZHANG T J, et al. Advances in study oniridoids in plants of Swertia L. and their pharmacological activity[J]. Chin Tradit Herb Drugs (中草药), 2008, 39(5): 790-795. [2] WANG Y, YANG J S. Review of studies of Swertia L. [J]. NatProd Res Dev (天然产物研究与开发), 1992, 4(1): 99-114. [3] ZHAO L J, ZUO Z C, ZOU H B, et al. Distilling swertiamarinfrom Swertia davidi Franch and its effect on resisting cancer cells[J]. Guid J Tradit Chin Med Pharm (中医药导报), 2006, 12(5):62-64. [4] BAO Y, JI W H, MA Y H, et al. Simultaneous determination of six main constituents in Swertia of Qinghai province and Sichuan province by HPLC [J]. China J Chin Mater Med (中国中药杂志),2006, 31(24): 2036-2038. [5] DING L, TANG G S, LI F S, et al. Determination of two main constituents in two type Swertia herbs [J]. J Chin Med Mater (中药材), 2008, 31(4): 533-535. [6] LIANG Y X, LIN P C, LU Y C, et al. Simultaneously determination of four effective components in Swertia tetraptera Maxim.by HPLC [J]. J Anhui Agri Sci (安徽农业科学), 2006, 34(10): 2163-2164.
产品链接: 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物 专注植提 精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |