不同工艺的金银花提取物组分比较研究 |
发布时间:2010-08-21 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:4058 |
黄云,肖艳萍,李娟,林海 (湖南医药工业研究所,湖南 长沙 410014) [摘要] 目的:采用HPLC法检测不同工艺所得金银花提取物的组分及绿原酸含量。方法:采用Symmetry ODS ( 4. 6 ×150mm, 5μm) ,ODS保护柱。流动相为乙腈- 0. 4%磷酸(8z 92) ,检测波长为327nm。结果:液相色谱图中只有采用改良石硫法所得提取物的组分与原石硫法基本保持一致,其它方法所得提取物的组分与原石硫法都有差别。结论:金银花提取物组分不同,抗菌作用则不同。由此可见绿原酸含量的高低尚不能说明金银花提取物质量的好坏。 [关键词] 金银花提取物;绿原酸;组分;高效液相色谱法 [Abstract ] Objective: HPLC was used to examine the components of honeysuckle extraction obtained by different p reparationand the content of Chlorogenic acid. Method: To use the SymmetryODS(4. 6 ×150mm, 5μm) , ODS Column. Mobile phase: acetoni2 trile - 0. 4% Phosphoric (8z 92) , detective wavelength was 327nm. Result: In liquid chromatography - mass spectrometry(LC - MS) ,only have the components of extraction obtained by imp rovementmethod of SH IL IU kep t uniform with p rimary method of SH IL IU, the components of extraction obtained by otherways had different from p rimary method of SH IL IU. Conclusion: the components of honey2 suckle extraction were different, and its anti - bacteria effectwas different. So, Chlorogenic acid whatever its content was the high or low couldn’t exp lain that the quality of honeysuckle extraction was good or bad. [ Key words ] Honeysuckle extraction; Chlorogenic acid; Components; HPLC 金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb. 红腺忍冬Lonicera confusa CD. 或毛花柱忍冬Lonicera dasystylaRehd. 的干燥花蕾或初开的花。具有清热解毒、疏散风热之功效,对多种细菌及病毒均有抑制作用,并且具较强的抗炎、抗变态反应的作用及提高机体抵抗力的作用。所含化学成分有绿原酸、异绿原酸、挥发油、咖啡酸、黄酮化合物、三萜皂苷、木犀草素及无机元素等,绿原酸(Chlorogenic acid)是金银花的主要药用成分,具有显著的清热解毒和抗菌消炎作用。 1 仪器与试药 1. 1 仪器 Waters高效液相色谱仪;Waters 2996二极管阵列检测器, Empower数据处理软件; Symmetry ODS柱( 4. 6 ×150mm, 5μm) ,ODS保护柱;大孔吸附树脂。 1. 2 试药 乙腈为色谱纯,重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。金银花药材(购自湖南省药材公司) ;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号: 110753 - 200212) 。 2 实验方法与结果 2. 1 金银花提取物的制备[ 1~3 ]。 2. 1. 1 石硫法 取金银花1kg,加水煎煮2次,每次2h,合并煎煮液,滤过,滤液加入石灰乳调pH值10~12,静置,滤出沉淀,加水适量,用硫酸调pH值6~7,搅匀,滤过,滤液浓缩至稠膏状,喷雾干燥,即得干膏。 2. 1. 2 改良石硫法 取金银花1kg,加(15、10)倍量的水, 80~90℃提取2次,每次2h,滤过,合并滤液,滤液浓缩至原体积的2 /5后,加入20%的石灰乳调pH值10~12,静置12h,滤出沉淀,加2倍量95%乙醇混悬,加50%硫酸调pH值3~4,混匀,滤过,滤液用40%NaOH调pH值6~7,过滤,浓缩至稠膏状,喷雾干燥,即得干膏。 2. 1. 3 超滤法处理[ 1 ] 取金银花1kg,加( 15、10 )倍量的水,煎煮2次,每次2h,滤过,合并滤液,滤液浓缩至原体积的2 /5后,静置,滤过,超滤,收集超滤液,浓缩至生药量,静置, 滤过,减压浓缩,真空干燥得干膏。 2. 1. 4 乙醇回流提取[ 1 ] 称取金银花1kg,置圆底烧瓶中,加(10、8)倍量70%乙醇,加热回流提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压浓缩,真空干燥得干膏。 2. 1. 5 大孔吸附树脂处理[ 2 ] 取金银花1kg,加(15、10)倍量的水, 90℃提取2次,每次2h,滤过,合并滤液,滤液加至已预处理的大孔吸附树脂上,加水洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,真空干燥得干膏。 2. 2 色谱条件的选择 色谱柱: Symmetry ODS柱( 4. 6 ×150mm, 5μm) ,ODS保护柱。流动相:乙腈- 0. 4%磷酸(8:92) 。检测波长为327nm。流速: 1. 0ml/min。柱温: 40℃。理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。 2. 3 干扰试验 按照上述色谱条件,分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl,注入色谱仪,记录色谱图,供试品色谱中,在与对照品色谱图相应的位置上有一相同的色谱峰,而阴性对照色谱在与对照品色谱图相应的位置上无峰,表明阴性没有干扰。 2. 4 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷中干燥48h的绿原酸对照品适量,加50%甲醇溶解,制成每1ml含绿原酸50μg的溶液,即得。 2. 5 供试品溶液的制备 取金银花提取物约0. 1g,研细,精密称定, 置50ml棕色量瓶中, 加50%甲醇约30ml, 超声(120W 40KHZ )处理20min,使溶解,放置至室温,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤,精密量取续滤液1ml至5ml棕色量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。 2. 6 线性关系的考察 分别精密吸取浓度为52. 5μg/ml的绿原酸对照品溶液6、8、10、12、14μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以绿原酸对照品进样量X ( ng)为横坐标,绿原酸峰面积积分值Y为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程: Y = 2. 57 ×103X + 2. 36 ×104 , r = 0. 9994。 2. 7 精密度试验 精密吸取同一浓度的对照品溶液10μl,重复进样5次,测定其峰面积积分值,结果RSD = 0. 1%。 2. 8 稳定性试验 分别精密吸取同一供试液10μl于0、1、2、4、8、24h进样,测定其绿原酸峰面积积分值。结果表明,供试品溶液在24h内峰面积积分值基本稳定, RSD = 0. 23%。 2. 9 加样回收率试验 取已知绿原酸含量( 7. 49% )的,每份0. 10g左右,共5份,精密称重。置棕色容量瓶中,分别按(1: 1) 精密加入绿原酸对照品,按供试品溶液的制备方法制备,按上述色谱条件操作,测定绿原酸峰面积积分值,计算回收率,结果平均回收率为103. 0% , RSD为1. 28%。 2. 10 金银花提取物含量测定 按照拟定的含量测定方法,按上述色谱条件操作,记录色谱图(见图1~6) ,测定金银花提取物中绿原酸的含量。(见附表)
3 讨 论 采用乙醇提取、超滤法处理、大孔吸附树脂处理、改良石硫法提取方法所得金银花提取物与原石硫法相比,绿原酸的转移率和含量都有了很大的提高。而采用乙醇提取、超滤法处理、大孔吸附树脂3种方法处理的提取物中绿原酸含量提高得更多,但它们的组分均发生了改变,与原石硫法有差别。液相色谱中,绿原酸色谱峰前,石硫法有的几个峰,提取物中有的消失了,有的下降了很多,且药理作用显示上述3种提取物的抗菌作用没有石硫法强[ 3 ] ,只有采用改良石硫法所得提取物的液相色谱图与原石硫法组分基本保持一致。由此可见,绿原酸含量的高低尚不能说明金银花提取物的质量好坏。
参考文献: [ 1 ]李志华,许让翻. 不同提取工艺对金银花中绿原酸提取率的影响[ J ]. 中草药, 2002, 33 (8) : 714 [ 2 ]高春荣,胡锦蓉,孙君社. 金银花中绿原酸的提取工艺[ J ]. 中国农业大学学报, 2003, 8 (4) : 5 [ 3 ]何伟,栾跃芳. 金银花提取工艺的研究[ J ]. 山东医药工业, 2003, 22 (2) : 3 相关产品链接: 苦杏仁苷 枇杷叶提取物-熊果酸 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 大花紫薇提取物-科罗索酸 上禾生物,专注植提,精于高纯 基于您对天然产物需求持续创新 |