熊果酸抗氧化性能的研究 |
发布时间:2010-08-06 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2471 |
熊果酸(Ursolic Acid)义名乌索酸,是一类五环三萜类化合物,其广泛存存于山楂、女贞子、白舌草、夏枯草、车前草、苦丁茶等多种天然植物巾,来源十分广泛。近几年的研究中发现,熊果酸具有多种生物活性,其在抗癌、防癌、保肝、抗菌、抗病毒、抗氧化以及降血压、降血脂、降血糖等方面均有广泛的应用,展现出良好的开发利用前景。但是存国内对于熊果酸的抗氧化性能的研究却尚未见到。因此,本实验针对熊果酸的抗氧化性进行了初步研究,为进一步研究熊果酸的抗氧化剂打下基础。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 熊果酸标准品、维生素C标准品由Sigma公司提供;KHPO-KH PO4缓冲液50mmoL/L,pH8.3;邻苯酚的盐酸溶液 50mmol/L;H2O2 8.8minol/L;FeSO、水杨酸一乙醇溶液9mmo]/L;所有试剂均为分析纯;甘露醇,双蒸水,甲醇。紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司);HH-8数恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造);PHS-3C数显酸度计(上海康仪仪器有限公司)。 熊果酸对照品长沙上禾生物科技有限公司可提供。 1.2 实验方法 1.2.1 熊果酸对超氧阴离子自由基(0 ·)的清除实验 本实验采用邻苯三酚白氧化法,即采用邻苯酚自氧化法产生超氧阴离子,生成有色中间产物,吸光度随之增加,使吸光度值与反应时间呈良好的线性关系。但是加入抗氧化性物质后会对其产生清除作用,从而对其进行抗氧化性能的评价,取试管加入不同浓度的熊果酸溶液(5mg/1OraL)各50、100、 20L以及200进行阳性对照,同时分别取相同体积的甲醇做对照。在试管中分别加入50retool/L, pH8.3 K,HPO –KH2PO 缓冲液4.5mL,在25℃ 水浴 锅保温lOmin,加人预热至25℃ 的50mmol/L邻苯三酚的盐酸溶液10mL迅速摇匀,倾入1 cm 的比色杯 中,以缓冲液调零,在325nm 处,每隔30s测吸光度1 次,连续测定15min。样品对0 ·自由基的清除率 (% )的计算公式如下: 清除率I(% ):[1-(A3-A )/(A1-A )]×100% 其中:A :不含样品的吸光度值;A :不含样品和 邻苯三酚的吸光度值;A :含有样品的吸光度值;A : 含样品,但不含邻苯三酚的吸光度值。 1.2.2熊果酸对羟自由基(·OH)的清除实验 本实验采用Feton体系法产生羟自由基,即:H 0:+ Fe” -·OH + H,O + Fe“ 。然后在体系rf1加入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质,该物质在510nm处有最大吸收,可以利用该吸光度值来表示羟自由基的含量 。取不同的试管分别加入0.5m g/mL熊 果酸标准品各50、100、200以及200甘露醇作为阳性对照。再分别加入1 mL 9mmol/L水杨酸一乙 醇溶液,1mL 9mrnol/L FeSO4,1 rnI 8.8mmoL/L H2O2,用双蒸水补齐至5mL,充分摇匀,迅速倒入1 cm 的比色杯中,于510nm 处测定其吸光度值,以甲醇调零。可以根据吸光度值判断样品对羟自由基的清除作用,其清除率I(% )计算公式如下: 清除率I(%)=[A。-(A -Ax。)]/A。×100% 其中:An为空白对照液的吸光度,A 为加入待 测溶液后的吸光度,A 为待测溶液的本底吸收值。 即以待测溶液和1mI 甲醇,lmL FeSO 和 1mL 水杨酸-乙醇溶液作为待测溶液的本 底吸收值。其中H 0 要在加入清除剂之后加入,以 使Feton体系产生的羟白南基被完全或部分清除 , 以利于总反应的进行。 2 结果与分析 2.1 熊果酸对超氧阴离子自由基(O ·)的清除 能力 邻苯三酚在碱性条件下能发生自氧化,生成有色中间产物和0·。当有自由基清除剂存在时,有色产物的生成量减少,可测定该自由基清除剂的活性。本实验研究比较了不同浓度熊果酸标准品与V 对0·的清除效果。熊果酸对o2-·具有较强的清除作 用,在一定的浓度下浓度与清除效果呈正相关。且 存20 g/mL时清除能力最强,可达88.42% ,但是对 超氧阴离子的清除能力不及相同浓度下的v 。 2.2 熊果酸对羟自由基(·OH)的清除能力 本实验采用Feton体系法产生羟自由基,加入水 杨酸捕捉·OH并产生有色物质,因此可以利用该吸 光度值来表示·OH 的含量。但是随着自由基清除剂的加入,有色产物的生成量减少,可测定该自由基 清除剂的活性,本实验比较了不同浓度熊果酸(5、10、20 g/mL)和甘露醇(20mg/mL)对羟自由基的清除作用,熊果酸对羟自由基有一定的清除作用,且在20mg/mL时清除作用最强,可达 86.35% ,同时也可以看出,同浓度下熊果酸对羟自由基的清除作用要强于甘露醇。 3 讨 论 近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然、低毒、易于提取的特点被广泛关注 ,而熊果酸以其广谱的生理活性备受瞩目,其广泛存在于白花蛇舌草、女贞子、乌梅、夏枯草等天然植物中,利于开发。目前,相关文献表明熊果酸具有抗氧化性 ,但是国内并没有相关的抗氧化性实验研究。因 此本实验对熊果酸的抗氧化性进行了探讨。 本实验结果表明,熊果酸具有较强的抗氧化性,在20 g/mL时对超氧阴离子和羟自由基的清除率即 可达88.42%和86.35% 。同时,对羟自由基的清除作 用强于同浓度的甘露醇。因此,熊果酸具有广泛的 开发和利用价值,在美容化妆产品领域具有广泛的前景,值得综合利用,加强资源开发,带来美容行业 新的明天。 |