杜仲叶醇提取物对大鼠血管内皮细胞的保护作用 |
发布时间:2010-07-22 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:3128 |
杜仲叶醇提取物对大鼠血管内皮细胞的保护作用 【摘要】 目的 探讨杜仲叶醇提取物(Alcohol extractive of Folium Eucommiae,AEFE)对动脉粥样硬化(AS)大鼠血管内皮细胞的保护作用。方法 复制实验性大鼠AS模型,AEFE(70、140 和420 mg·kg-1·d-1,ig)给药6 w,实验结束时测定血浆一氧化氮(NO)、内皮素1(ET1)、血栓素B2(TXB2)和6酮前列腺素F1α(6KPGF1α)的含量;取主动脉和冠状动脉进行形态学观察。结果 AEFE 140和420 mg·kg-1·d-1可明显升高AS模型大鼠血浆中NO、ET1和6KetoPGF1α浓度(P<0.01),而对TXB2无影响;明显减轻AS大鼠主动脉和冠状动脉内皮细胞的缺失,但两组间无显著差异。结论 AEFE具有维持NO/ET和TXA2/PGI2平衡、保护血管内皮细胞结构和功能的作用。【关键词】 动脉粥样硬化;杜仲叶;醇提取物;内皮细胞;绿原酸;杜仲提取物 杜仲具有降低血脂、平衡调节血压等功效〔1〕,近来的研究显示杜仲叶醇提取物(Alcohol extractive of Folium Eucommiae,AEFE)还可作用于内皮细胞促进一氧化氮(NO)的释放〔2〕。本实验首次观察AEFE对动脉粥样硬化(AS)大鼠血浆NO、内皮素(ET)1、6酮前列腺素F1α(6KetoPGF1α)、血栓素B2(TXB2)水平和主动脉、冠状动脉形态的影响,探讨AEFE对AS大鼠内皮细胞的保护作用。 1 材料与方法 1.1 动物 雄性SD大鼠,体重200~250 g,鼠龄80~120 d。由重庆医科大学实验动物中心提供(医学动物合格证:SCXK渝20020003)。 1.2 药品与试剂 AEFE:根据文献〔3〕制备并浓缩至100%(相当于1 ml含生药1 g)备用,用时以0.5%羧甲基纤维素稀释;由重庆医科大学化学教研室提供并鉴定。洛伐他汀:重庆大新药业股份有限公司,批号040501。胆固醇:北京鼎国生物技术有限责任公司,批号DH061;猪胆盐:北京奥博星生物技术有限公司,批号20050308;丙硫氧嘧啶:上海复星朝晖药业有限公司,批号040708;VitD3注射液:上海通用药业股份有限公司,批号041108。NO测定试剂盒:南京建成生物工程研究所;ET1、6KetoPGF1α和TXB2放射免疫试剂盒:解放军总医院科技开发中心放免所;其余试剂均为国产分析纯。 1.3 实验仪器 3K30型高速低温离心机:美国Sigma公司;722型分光光度计:上海菁华科技仪器有限公司;SN695B型放射免疫测定仪:上海核辐光电仪器设备有限公司。 1.4 方法 1.4.1 大鼠AS模型的复制和实验分组 参考文献〔4〕方法建立大鼠AS模型,于实验开始时给予模型组及各给药组大鼠腹腔注射VitD3注射液(总剂量60 万U/kg,分3 d给完),同时给予高脂饲料(3%胆固醇,0.5%猪胆盐,0.2%丙硫氧嘧啶,5%白糖,10%猪油,81.3%基础饲料)。实验动物随机分为6组,每组8只:正常对照组,普通基础全价饲料;AS模型组:高脂饲料;AEFE高中低剂量组,高脂饲料+AEFE (420,140,70 mg·kg-1·d-1);洛伐他汀组:高脂饲料+洛伐他汀(4 mg·kg-1·d-1)。各给药组在造模2 w后开始灌胃给药(0.5 ml/100 g湿重),共给药6 w。实验周期为8 w。 1.4.2 血浆NO、ET1、6KetoPGF1α和TXB2含量测定 1.4.3 主动脉和冠状动脉形态学观察 取主动脉和心脏用10%甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色光镜观察。 1.5 统计学方法 2 结 果 2.1 AEFE对血浆NO和ET1含量的影响 AS模型组血浆NO和ET1浓度与正常对照组相比均明显降低(P<0.01);与AS模型组相比,AEFE低剂量组两指标改变无明显差异,AEFE中、高剂量组和洛伐他汀组NO和ET1浓度明显升高(P<0.01)。AEFE中、高剂量组NO水平高于洛伐他汀组,但无统计学意义(表1)。 2.2 AEFE对血浆6KetoPGF1α和TXB2含量的影响 AS模型组与正常对照组相比血浆6KetoPGF1α浓度明显降低而TXB2浓度显著升高(P<0.01);与AS模型组相比,AEFE低剂量组两指标改变无明显差异,AEFE中、高剂量组和洛伐他汀组6KetoPGF1α浓度明显升高(P<0.01),洛伐他汀组达到正常水平,但各组TXB2浓度无差异(表1)。表1 各组大鼠血浆NO、ET1、6KetoPGF1α和TXB2浓度的变化(略) 2.3 AEFE对主动脉和冠状动脉形态的影响 正常对照组大鼠主动脉和冠状动脉结构完整,层次清晰,内膜内皮细胞连续完整。AS模型组主动脉内皮细胞呈连续性缺失,底层胶原纤维暴露,内皮下间隙增宽,内弹力板分离断裂;AEFE低剂量组病理改变基本同AS模型组;AEFE中、高剂量组和洛伐他汀组动脉结构完整,层次清晰,内膜较光滑,偶见局部少量内皮细胞缺失。AS模型组冠状动脉可见连续性内皮细胞缺失、数目不一的泡沫细胞和钙质沉着;AEFE低剂量组冠脉改变基本同AS模型组,而中、高剂量组和洛伐他汀组内皮基本完整,其下偶见泡沫细胞,管壁可见轻度增厚和少量钙质沉着,其病变程度明显好于AS模型组,但三组间无显著差异(图1和图2)。 3 讨 论 血管内皮细胞损伤被认为是AS最重要的始动环节,继发于它的内皮通透性、黏附性、血液凝固性改变及所释放的大量细胞因子及生长因子将导致AS发生的一系列连锁反应〔5〕。血管内皮的正常功能是通过内皮分泌血管活性物质(如NO,ET1及PGI2等)来实现的,因此内皮损伤后首先表现为血管内皮细胞分泌功能的失调。有研究表明高血脂症可引起ET1含量升高、NO水平下降〔6,7〕;然而部分学者认为高血脂症对内皮细胞有毒性作用,损坏细胞的结构和功能,引起ET1、NO水平均降低〔8,9〕。孙金明等〔10〕研究高血脂症对内皮血管活性物质合成和释放的动态影响,结果显示高血脂症对ETl基因表达及ETl含量的影响呈波动性变化,高血脂症初中期ET1基因的表达升高,随后呈下降趋势。PGI2和TXA2维持平衡对预防AS的发生,防止血栓形成有着重要的调节作用。由于两者的不稳定性,故目前均以测定6KetoPGF1α和TXB2作为判断其浓度的指标。在AS发病过程中,oxLDL增加,细胞过氧化脂质的升高,可以抑制血管壁PGI2合酶的活性,使PGI2合成减少,而血小板TXA2生成增加。 在本实验中,高胆固醇饮食造模8 w后,AS模型组大鼠血浆NO、ET1和6KetoPGF1α含量较正常组明显降低,TXB2浓度明显升高,同时血管内皮细胞有连续性缺失,血管结构紊乱,说明模型组血管内皮功能和结构受到明显的损伤,动脉粥样硬化发生;AEFE中、高剂量和洛伐他汀能明显增加血浆NO、ET1和6KetoPGF1α水平,使主动脉和冠状动脉内皮细胞损伤减轻、血管结构基本正常,但对TXB2无影响,提示AEFE具有维持NO/ET和TXA2/PGI2平衡、保护血管内皮细胞结构和功能,防治AS的作用。此时的NO、ET1和PGI2水平升高是内皮功能修复的一种表现,对TXA2无影响提示AEFE的作用靶点不在血小板。AEFE升高NO的作用较洛伐他汀明显,而对PGI2水平的影响不及洛伐他汀,说明两药对内皮细胞功能的修复影响环节不相同。AEFE中、高剂量两组疗效无明显差异可能是AEFE 140 mg·kg-1·d-1已接近最大效应,故增加剂量药物效应无显著增加。 附注: 上禾生物科技提供杜仲提取物 绿原酸5-98%的产品,同时提供杜仲提取物产品定制服务,按您的要求定制您所需的产品 文献内容来源于网络,我们没有做文字和实验数据及实验结论的修改。内容仅供参考。 相关产品链接: 杜仲提取物 绿原酸 金银花提取物 【参考文献】
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