厚朴提取物厚朴酚与和厚朴酚液相检测条件分析 |
发布时间:2020-10-01 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:868 |
厚朴提取物厚朴酚与和厚朴酚液相检测条件分析 色谱条件 色谱柱为Diamonsil® C18(2)(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(70∶30);检测波长294 nm;柱温30 ℃;体积流量1 mL/min;进样量10 μL;在此色谱条件下,厚朴酚、和厚朴酚分离度均大于1.5,理论塔板数按厚朴酚峰计算不低于3 800。 对照品及供试品溶液的制备 对照品溶液的制备 精密称取厚朴酚对照品2.01 mg、和厚朴酚对照品2.32 mg,分别置于25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成含厚朴酚80.40 μg/mL与和厚朴酚92.80 μg/mL混合对照品溶液。 供试品溶液的制备 厚朴饮片粉碎,过40目筛,置于60 ℃的烘箱中烘干后装入料筒,置入超临界CO2萃取装置进行提取,收集分离釜1和2的提取物并均匀混合,精密称取提取物适量,置于25 mL量瓶中,加甲醇使之溶解并稀释至刻度,超声5 min,静置,过0.45 μm的微孔滤膜,即得供试品溶液。 HPLC分析方法学考察 色谱条件的选择 分别采用甲醇-水的不同配比(78∶22、70∶30、65∶35)进行筛选,在甲醇-水(70∶30)的流动相比例下目标峰不受其他杂质峰的干扰,峰形对称。用紫外分光光度计测定厚朴酚对照品的吸光度,确定检测波长294 nm。在上述色谱条件下,和厚朴酚、厚朴酚分离良好,保留时间分别为8.4、11.2 min。色谱图见图1。 标准曲线的制备 分别精密吸取厚朴酚与和厚朴酚对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL置于5 mL量瓶中,甲醇定容至刻度,摇匀,制成不同质量浓度梯度的系列对照品溶液,按“2.3.1”项下方法进样10 μL测定峰面积,以峰面积为纵坐标(Y)、质量浓度为横坐标(X)绘制标准曲线,得回归方程,厚朴酚的线性回归方程分别为Y=12 554.8 X+30 696.6,r=0.999 3;和厚朴酚为Y=16 703.9 X+70 459.8,r=0.999 1;结果表明,厚朴酚与和厚朴酚进样质量浓度分别在8.04~80.4 μg/mL和9.28~92.8 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系。 2.3.3 精密度试验 分别取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液各10 μL,依法连续进样6次,测定峰面积,结果厚朴酚与和厚朴酚峰面积的RSD分别为2.41%和1.86%,表明仪器精密度良好。 2.3.4 重复性试验 取厚朴饮片按“2.2.2”项下方法平行配制6份,进样测定样品中厚朴酚与和厚朴酚的含量,结果表明厚朴酚与和厚朴酚质量分数的RSD分别为2.62%、2.78%,说明所建立的分析方法重复性较好。 2.3.5 稳定性试验 精密吸取“2.3.4”项重复性试验1号供试品溶液,分别于0、2、4、6、12、24 h时测定峰面积。结果厚朴酚、和厚朴酚峰面积的RSD分别为1.63%和2.13%,表明所配制的供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.3.6 加样回收率试验 精密称取6份已测定厚朴酚与和厚朴酚含量的厚朴粗提取物,置于5 mL量瓶中,每份精密加入取厚朴酚与和厚朴酚对照品溶液各1 mL,加甲醇至近刻度线,摇匀,超声30 min,放冷后定容至刻度线,微孔滤膜滤过。按“2.3.1”项下色谱条件测定,分别计算加样回收率,结果厚朴酚与和厚朴酚的平均加样回收率分别为99.15%、99.07%,RSD分别为2.06%、3.10%。
上禾生物----厚朴原料基地里的厚朴提取物生产企业
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