厚朴抗氧化活性成分的提取分离及其抗氧化活性测试研究 | 厚朴抗氧化活性成分的提取分离及其抗氧化活性测试研究 |
| 发布时间:2020-06-27 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:661 |
| 厚朴药材是木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮,属重庆道地药材。厚朴中主要含有挥发油、木脂素类、生物碱类、多糖类等化学成分,具有抗菌、抗炎等药理作用,具有一定的研究价值。目前,对厚朴的研究主要集中在木脂素类成分厚朴酚、和厚朴酚的提取工艺及抗菌等药理作用,对厚朴中其他活性成分及生物活性研究甚少。 因此,本论文主要针对厚朴药材中的活性成分木脂素类、生物碱类、多糖类成分进行提取分离,并对分离制备的厚朴提取物、厚朴活性成分及其有效成分的抗氧化活性进行评价,为厚朴药材的进一步开发利用提供科学依据;利用耗样量低、集成化的微流控技术,结合化学发光抗氧化体系反应过程及原理,搭建微流控化学发光检测系统,用以药物的抗氧化性评价,实现天然产物抗氧化成分的快速筛选。 本文的主要研究工作及结果包括: 1.以厚朴药材具有抗氧化活性的成分及化合物为目标,采用不同溶剂体系提取制备得到厚朴水提物、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物,采用HPLC法及Folin-Ciocalteu法测定其厚朴酚、和厚朴酚含量及总酚含量,初步了解提取物中物质组成情况及其抗氧化活性,其中,80％乙醇提取物中厚朴酚、和厚朴酚含量最高,分别为209.4 mg/g、159.8 mg/g,总酚含量为228.3mg GAE/g。进而,从提取物中分离得到厚朴中木脂素、生物碱、多糖三类活性成分作为后续抗氧化活性测试样本。采用水提醇沉法制备厚朴粗多糖,苯酚-硫酸法测定其含量为50.8％;采用有机溶剂提取法制备厚朴总生物碱,酸性染料比色法检测其含量为63.8％;采用大孔树脂吸附技术分离制备厚朴木脂素,显色法测定其含量为87.2％。采用紫外分光光度法,实现对厚朴药材中厚朴酚、和厚朴酚的含量进行同时测定,检测结果略低于HPLC法测定结果,可用于厚朴药材有效成分的初步判断。以80％乙醇为溶剂对厚朴进行提取后,采用有机相萃取,并利用硅胶柱层析、薄层色谱法、重结晶等技术对乙酸乙酯萃取部分进一步分离纯化,制备得到厚朴中的有效成分厚朴酚、和厚朴酚,并采用紫外、高效液相、核磁共振等技术对其纯度、结构做鉴定,纯度分别达到97.14％、92.93％。将制备所得的厚朴的水提取、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物三种提取物,厚朴中粗多糖、总生物碱及木脂素三种活性成分,以及厚朴中的有效成分厚朴酚、和厚朴酚两种单体化合物作为后续抗氧化活性测定的样本,为厚朴抗氧化活性成分的确定奠定物质基础。 2.采用邻苯三酚-鲁米诺体系、过氧化氢-鲁米诺体系、Fe2+-过氧化氢-鲁米诺体系三种化学发光体系对制备的厚朴水提物、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物、厚朴粗多糖、厚朴总生物碱、厚朴木脂素、厚朴酚、和厚朴酚七种样本对超氧阴离子(O2-?)自由基、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(?OH)的清除能力进行测定,并以抗坏血酸作为阳性对照物,计算得到不同样本对不同自由基的半数抑制浓度IC50值,用以评价各成分抗氧化活性。结果表明:厚朴各成分均对三种自由基有一定的清除作用,其中,对过氧化氢(H2O2)自由基的清除能力最强,且强于阳性对照物。另外,厚朴水提物、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物抗氧化活性大小依次为:80％乙醇提取物>60％乙醇提取物>水提物;厚朴粗多糖、总生物碱、木脂素抗氧化活性依次为:总生物碱>木脂素>粗多糖;就厚朴中两种有效成分而言,和厚朴酚对三种自由基的清除能力远远强于厚朴酚,也强于阳性对照物。结果表明,厚朴中成分大多具有良好的抗氧化活性,具有一定的研究及利用价值。 3.根据化学发光反应原理及反应过程,设计并制作了集成八个检测通道于一体的微流控化学发光芯片,该芯片具有结构简单、耗样量小、检测快速等优点。在微流控化学发光芯片上实现对厚朴酚、和厚朴酚清除过氧化氢自由基(H2O2)的能力进行在线测定,测定结果与微孔板化学发光法检测结果基本一致,证明了该芯片体系的可行性,在抗氧化活性检测及筛选上具有明显的优势和潜在的实用价值。
厚朴提取物 上禾生物 0731*84213302
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