蔬菜中芹菜素高效液相色谱测定

发布时间:2020-05-31 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:2005

芹菜素是一种天然黄酮类物质，广泛存在于蔬菜、水果中。

研究表明，芹菜素具有多种生物学功能，如抗氧化性、抗炎、抗肿瘤、中枢镇静等〔1-3〕。本文旨在建立蔬菜中芹菜素高效液相色谱测定法，并测定哈尔滨市售41种蔬菜中芹菜素含量。现将结果报告如下。

1 对象与方法

11 仪器与试剂 waters 高效液相色谱分析仪（waterstm2690分离系统，waters996二极管阵列检测器，waters色谱工作站，millennium32软件），旋转蒸发器re-52a(上海精科实业有限公司)，esj180-4型分析天平（沈阳龙腾电子秤量仪器有限公司）；无水乙醇、甲醇、冰醋酸、浓盐酸等（均为ar级）；色谱纯甲醇；芹菜素标准品（美国sigma公司）；市售41种蔬菜。

12 色谱条件色谱柱为phenomenex c18柱（250 mm×460 mm,4u），流动相为甲醇：水＝60：40（体积比），三氟乙酸调节至ph 25，流速1 ml/min，进样量12 μl（自动进样），检测波长338 nm,柱温为20℃。

13 方法（1）对照品溶液的制备：精密称取芹菜素标准品1 mg，置50 ml容量瓶中，加入甲醇约20 ml，微热溶解，冷却至室温，加入少量冰醋酸〔4〕，加甲醇稀释至刻度，摇匀，获得浓度为20 mg/l的对照品储备溶液。（2）供试品溶液的制备：将市售蔬菜去枯叶洗净，于烤箱中40℃烤干，备用。精确称取蔬菜干品400 g，加入80％乙醇/水100 ml（其中每100 ml溶液中含10 ml浓盐酸），同时加入020 g特丁基对苯二酚（tbhq），90℃下回流3 h，冷却至室温，用布氏漏斗（bücher）过滤，精确回收滤液备用。供试品溶液上柱前离心机3 000 r/min离心20 min。

2 结果

21 线性关系校准曲线取对照品储备溶液，用甲醇稀释，制成浓度（mg/l）分别为10，8，6，4，2，1的对照品溶液，依次进样测定，以浓度c（mg/l）为自变量，峰面积响应a(μv×s)为应变量，线性拟合，得线性方程a=76035567c+7169570 (r=0999)，表明芹菜素标准品在12～120 μg范围内与色谱峰面积响应有良好的线性关系，最低检出限为010 mg/l。

22 正交设计优化样品提取条件(表1) 本实验以溶剂、溶剂浓度、提取时间为考察因素，每个因素设3个水平，采用l9（34）正交设计，以芹菜素的提取量为观察指标，优化蔬菜中芹菜素的提取条件，得出最佳提取条件为80%乙醇/水提取3 h（内含12 mol/l盐酸〔5〕，2 g/l的tbhq）。

23 重复性实验平行取5份样品（芹菜叶）200 g,按优化条件处理，进行测定。计算得5份样品中芹菜素的含量（mg/kg）分别为：4 86014，5 55119，5 65740，5 22927，5 57729，平均值为5 37506 mg/kg，相对标准偏差(rsd)为616%<10%（n=5）。说明本实验所确定的蔬菜中芹菜素的提取条件重复性很好。

表1 l9（34）正交实验因素水平设计（略）

24 精密度实验选择10，6，2 mg/l的芹菜素标准品溶液，连续6次进样，rsd分别1187%，3983%，0149%，均<10％，表明仪器的精密度很好。

25 稳定性实验选择10，6，2 mg/l的芹菜素标准品溶液连续5 d同一时间测定，rsd分别为177%，559%，431%，均<10%，表明芹菜素标准品溶液在5 d内稳定。

26 加标回收率实验精确称取8个平行样品（芹菜茎200g）,4个样品中加入标准品010 mg,按照优化条件同时平行处理，平均回收率为9980%。

27 不同蔬菜干品中芹菜素的含量(表2)

表2 哈尔滨市9～10月份蔬菜干品中芹菜素含量（略）

3 讨论

目前对总黄酮类物质的检测多用铝显色法。本文建立的方法稳定，最低检出限为010 mg/l，明显优于文献中报道的最低检出限为04 mg/l〔6〕。样品有效成分的提取易受到提取溶剂、提取时间、提取温度的影响，本实验对此采用正交设计摸索条件，得到了本实验中的最佳提取条件。在本文确定的色谱条件下，芹菜素获得很好分离，且准确度和精密度均较高。芹菜素的抗氧化性明显优于维生素c和维生素e，在外界易受到温度的影响，因此，在本实验样品前处理中，分别采用了30℃，40℃，50℃，70℃下干燥箱烘干。结果显示，样品在40℃以下芹菜素的含量无明显变化，50℃以上芹菜素有降解，与文献报道相符〔5〕。在本实验中测得多种蔬菜中的芹菜素的含量，在当地芹菜叶茎、小白菜等10种蔬菜中含量均>100 mg/kg，而在蒜苔、蒜黄等11种蔬菜中未测出，其他蔬菜中芹菜素的含量均低于100 mg/kg。而文献中报道〔5〕，中国大白菜中芹菜素含量为1870 mg/kg，大辣椒为2720 mg/kg,大蒜为217 mg/kg,与本实验测得结果中国大白菜为16286 mg/kg，大辣椒为6370 mg/kg，大蒜为16027 mg/kg有一定的差异。说明不同地域、环境可能对蔬菜中芹菜素含量有影响。

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