液相色谱法测定小春花口服液木犀草素含量

发布时间:2020-05-31 信息来源:admin 发布人:admin 点击次数:1975

小春花为阴地蕨科植物阴地蕨sceptridium ternatum(thunb.)lyon的带根全草,为福建民间习用草药,性味甘平,味淡,具有平肝、清热、镇咳和清火、明目、解毒祛风的功效。小春花口服液(小伏口服液)是依据民间经验由小春花等药物组成的复方制剂,具有清肝解热、散风解毒的功效,实验表明该制剂有抗炎、免疫调节等作用,临床用于治疗呼吸系统疾病。笔者对小春花口服液主要有效成分木犀草素进行定性及含量测定,建立该制剂的质量控制标准。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器高效液相色谱色谱仪(focus型,美国光谱物理公司),紫外可见分光光度计(tu1221型,北京普析通用仪器有限公司),离心机(abbott,美国雅培仪器公司),电子天平[(ae240型,mettler仪器(上海)有限公司],电热恒温干燥箱(gzxdh4045s,上海跃进医疗器械厂),三用紫外分析仪(zfi型,上海顾村电光仪器厂),硅胶板(100 mm×200 mm,青岛海洋化工厂分厂)。

1.1.2试药小春花及小春花口服液由福建省立医院药剂科提供。水为重蒸馏水;乙酸乙酯、苯、甲酸、磷酸、甲醇、石油醚、无水乙醇均为分析纯。对照品为木犀草素标准品(中国药品生物制品检定所,批号111520200201)。

1.2方法

1.2.1样品制备(1)称取干燥粉碎小春花5 g于索氏提取器中,加石油醚(60~90 ℃)100 ml,回流提取至石油醚无色,取出晾干。加无水乙醇100 ml,回流提取7 h,提取液加无水乙醇定容至50 ml作为供试品。(2)取木犀草素标准品适量,精密称定,加乙醇溶解,配成1 mg/ml木犀草素对照品。

1.2.2有效成分薄层色谱鉴别硅胶g0.5%cmcna板10 cm×20 cm,105 ℃活化1 h,展开剂:苯乙酸乙酯甲酸(8∶2∶0.5)。将供试品与对照品点于同一薄层板上,展开,晾干,三用紫外分析仪下(254 nm)观察供试品与对照品。对应位置均呈较明显的暗斑,表明供试品中含木犀草素(图1)。

1.2.3木犀草素含量测定(反相高效液相色谱法)

1.2.3.1色谱条件色谱柱为ywg c18ods柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相由0.4%磷酸缓冲液(ph 3)甲醇(50∶50)组成,流速1 ml/min,柱温25 ℃,进样量10 μl,紫外检测波长355 nm 。木犀草素峰保留时间约15 min。精密称取木犀草素标准品适量,配制成浓度为35 μg/ml甲醇溶液,分别取1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 ml,用甲醇定容至25 ml,进样(10 μl)得色谱图,绘制标准曲线(图2)。

1.2.3.2色谱和光谱鉴别取供试品2 ml,10 000 r/min离心10 min,上清液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液10 μl进样,供试品色谱图保留时间约15 min处可见木犀草素峰,并与供试品中其他成分色谱峰较好分离。分别取5批次本院生产的小春花口服液2 ml,10 000 r/min离心20 min;上清液用微孔滤膜(0.45 μm)加压滤过,续滤液10 μl进样,依上述色谱条件作色谱图(图3)。

2结果

2.1木犀草素标准曲线以木犀草素浓度(x)作为横坐标,其色谱峰面积(y)作为纵坐标进行线性回归。结果回归方程为:y＝35 771.18x2 214.22,r=0.999 3。木犀草素在14.32~43.42 μg/ml范围内符合比耳定律,线性关系良好。

2.2测定方法的精密度与回收率日间分别配制5批次浓度为14.32 μg/ml和35.80 μg/ml木犀草素样品,依上法测定,日间变异为2.68%和2.09%,样品回收率为99.83%和98.66%(表1)。

2.3小春花口服液木犀草素含量测定5批次本院生产的小春花口服液含木犀草素的浓度分别为16.38,17.39,17.43,17.05和16.13 μg/ml,平均为(16.88±0.53)μg/ml。表1木犀草素样品的日间变异和回收率

2.4木犀草素标准品及小春花口服液样品分别放置1,3,5,7 d后测定峰面积值,基本无变化,说明标准品及样品相当稳定。

3讨论

3.1小春花的主要化学分为黄酮类、阴地蕨素、槲皮素等。叶的浸出成分水解后含木犀草素[1]。小春花口服液(小伏口服液)是由小春花等药物以60%乙醇水加热提取数小时后浓缩去乙醇而进一步配制成的复方制剂。小春花口服液保留约15 min处色谱峰的紫外光谱,与木犀草素对照品在同一保留时间处色谱峰的紫外光谱均在200~400 nm,并与文献[5]的光谱峰位置一致。通过对小春花口服液进行薄层层析及高效液相色谱和光谱特征分析,笔者证实小春花口服液含木犀草素,后者含量可作为该制剂提取制备工艺的客观指标。

3.2小春花口服液中木犀草素在上述色谱分离条件下,与其他成分色谱峰基本分离。以木犀草素计理论塔板数不低于6 000，口服液中其他成分在上述色谱分离条件下不干扰测定结果。运用高效液相色谱法测定小春花口服液中木犀草素含量,分离度好,快速准确,为全面客观地建立小春花口服液质量标准提供了依据。

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