植物提取物COA里面含量的检测方法

由于产品有效成分不同，其含量检测的也会采取不同方法，有簿层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC）、气相色谱法（GC）、滴定法、重量法、分光光度法（包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、原子吸收分光光度法等）、质谱法等。

一：分光光度法

1、原理：是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。

2、分类：

（1）对照品比较法

按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度∶

CX=（AX/AR）CR

式中 CX为供试品溶液的浓度；

AX为供试品溶液的吸光度；

CR为对照品溶液的浓度；

AR为对照品溶液的吸光度。

（2）吸收系数法

按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。

（3）比色法

供试品溶液加入适量显色剂后测定吸光度以测定其含量的方法为比色法。

用比色法测定时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后，以相应试剂为空白，在各品种规定的波长处测定各份溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。

也可取对照品溶液与供试品溶液同时操作，显色后，以相应的试剂为空白，在各品种规定的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度，按上述（1）法计算供试品溶液的浓度。

除另有规定外，比色法所用空白系指用同体积溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理制得。

二：液相色谱法

1、原理：储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来，然后根据图谱中目标物质信号的大小来对产品浓度进行定性和定量分析。目前应用最多的是高效液相色谱法。

2、分类：

（1）内标准法

取标准被测成分，按依次增加或减少的已知阶段量，各自分别加入各单体所规定的定量内标准物质中，调制标准溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱，根据色谱图取标准被测成分的峰面积和峰高和内标物质的峰面积和峰高的比例为纵坐标，取标准被测成分量和内标物质量之比，或标准被测成分量为横坐标，制成标准曲线。然后按单体中所规定的方法调制试样液。在调制试样液时，预先加入与调制标准液时等量的内标物质。然后按制作标准曲线时的同样条件下得出的色谱，求出被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰积或峰高之比，再按标准曲线求出被测成分的含量。

（2）标准曲线法：

取标准被测成分按依次增加或减少阶段法，各自调制成标准液，注入一定量后，按色谱图取标准被测成分的峰面积或峰高为纵坐标，而以标准被测成分的含量为横坐标，制成标准曲线。然后按单体中所规定的方法制备试样液。取试样液按制标准曲线时相同的条件作出色谱，求出被测成分的峰面积和峰高，再按标准曲线求出被测成分的含量。

（3）对照品比较法：

按规定方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致， 在规定的色谱条件下分别做出色谱，得出被测成分的峰面积和峰高，按下式计算供试品中被测溶液的浓度，即可算出样品成分含量

CX=（AX/AR）CR

式中 CX为供试品溶液的浓度；

AX为供试品溶液的峰面积或峰高；

CR为对照品溶液的浓度；

AR为对照品溶液的峰面积或峰高。

（4）峰面积百分率法

以色谱中所得各种成分的峰面积的总和为100，按各成分的峰面积总和之比，求出各成分的组成比率。

三：气相色谱法：

1、原理：气液色谱法是一种在有机化学中对易于挥发而不发生分解的化合物进行分离与分析的色谱技术。气相色谱的典型用途包括测试某一特定化合物的纯度与对混合物中的各组分进行分离（同时还可以测定各组分的相对含量）在某些情况下，气相色谱还可能对化合物的表征有所帮助。

2、分类：气相色谱分析分类和液相色谱基本相同。

此外还有滴定法、重量法、质谱分析法、液质联用、气质联用等各种分析方法，在此就不一一阐述。

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